[发明专利]一种SAMHD1基因敲除细胞系的构建方法有效
| 申请号： | 201410654987.9 | 申请日： | 2014-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN104450784A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 靳昌忠;吴南屏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种SAMHD1基因敲除细胞系的构建方法，首先针对SAMHD1基因CDS1和CDS2共设计4对识别序列；然后将靶点识别单元模块的基因片段分别按照4对识别序列进行串联，并克隆入pCAG-T7-TALEN(Sangamo)-Destination质粒，构建4对TALEN表达质粒对；将4对TALEN质粒对分别转染293T细胞，并用新霉素筛选出敲除SAMHD1基因的细胞系；所述方法能够在基因组SAMHD1靶位点造成移码突变，形成目标基因敲除突变体，达到从基因组中稳定敲除SAMHD1基因的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 samhd1 基因 细胞系 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种SAMHD1基因敲除细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）针对SAMHD1基因的CDS1选取作用靶点，并设计2对识别序列，分别为L1/R1、L2/R2；针对SAMHD1基因的CDS2选取作用靶点，并设计2对识别序列，分别为L3/R3、L4/R4；L1~L4的序列如SEQ ID NO.17~SEQ ID NO.20所示，R1~R4的序列如SEQ ID NO.21~SEQ ID NO.24所示；（2）将靶点识别单元模块的基因片段分别按照L1/R1、L2/R2、L3/R3、L4/R4序列进行串联，串联成功后克隆入pCAG‑T7‑TALEN(Sangamo)‑ Destination质粒，共构建4对TALEN表达质粒对；其中，靶点识别单元模块的基因片段按照L1序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；按照R1序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；按照L2序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；按照R2序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；按照L3序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；按照R3序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；按照L4序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；按照R4序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示；（3）将构建好的4对TALEN表达质粒对分别用脂质体转染试剂盒转染到表达SAMHD1的293T细胞系中，48小时后将细胞在含有浓度为100ug/ml的新霉素的DMEM培养基中培养10‑14天，筛选出活细胞，得到敲除SAMHD1基因的细胞系。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201410654987.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
