[发明专利]植物叶片中琥珀酰丙酮的检测方法

摘要

一种植物叶片中琥珀酰丙酮的检测方法，是取叶片，液氮研磨后用过量碱溶液进行超声提取，冰浴浸泡后离心、过滤，加入盐酸羟胺水溶液，水浴后离心、过滤；于滤液中加入浓盐酸，用色谱纯级乙酸乙酯萃取，得到的有机相旋转蒸发，入氮气吹干仪吹近干后加入硅烷化试剂，水浴后再次入氮气吹干仪吹干，加入色谱纯级乙酸乙酯溶解样品瓶中固体，进行GC-MS分析，并与该分析条件下琥珀酰丙酮标准品的出峰时间和特征峰进行比较。本检测方法杂质少、灵敏度高，步骤较少、方便快捷；有效地实现了对植物中琥珀酰丙酮的检测，填补了现有技术中尚没有可检测植物中琥珀酰丙酮的技术的空白，为研究植物乃至生物体内酪氨酸代谢紊乱提供了有力的工具。

主权项

一种植物叶片中琥珀酰丙酮的检测方法，其特征在于，该方法步骤如下：a、浸取：取叶片，液氮研磨后置于过量的pH值为11‑13、摩尔浓度为10mol/L的NaOH溶液或KOH溶液中，超声提取10‑15min，超声频率为35‑45MHZ，再于冰浴下浸泡1‑2小时，浸泡液在5‑7℃下离心，过滤；b、异恶唑化：于上述滤液中，按每20ml滤液加2.8‑3.2ml质量体积浓度为10g/L的盐酸羟胺水溶液的比例，加入盐酸羟胺水溶液，在55‑65℃下水浴40‑80min，常温下离心，过滤；c、转移溶剂：按每20ml滤液加2.4ml摩尔浓度为12mol/L的浓盐酸的比例，于b步骤所得滤液中加入浓盐酸，再按每20ml滤液加10mL、8mL、5mL色谱纯级的乙酸乙酯的比例，依次加入乙酸乙酯萃取，合并有机相；d、硅烷化：将上述有机相旋转蒸发，蒸发后的溶液体积是每4g叶片原料得1‑3ml，入氮气吹干仪吹近干即保证不被完全吹干，按每4g叶片原料加175‑225ul硅烷化试剂的比例加入硅烷化试剂，于60‑70℃下水浴85‑95min，；再入氮气吹干仪吹干后，按每4g叶片原料加40‑120ul色谱纯级乙酸乙酯的比例加入色谱纯级乙酸乙酯溶解样品瓶中固体，进行GC‑MS分析，并与琥珀酰丙酮标准品配制成的溶液在该GC‑MS分析条件下得到的琥珀酰丙酮标准品的出峰时间和特征峰进行比较。