[发明专利]抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外制备方法

摘要

本发明涉及一种抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外制备方法。本发明以鸡脾脏或外周血为原料，制成淋巴细胞单层，然后用植物血凝素和鸭瘟病毒诱导培养淋巴细胞，体外生产抗鸭瘟病毒特异性转移因子。本发明所制备的特异性转移因子可以用于预防和治疗鸭瘟，同时可以提高鸭自身的免疫力。本发明具有特异性强、成本低、效果好等优点，是一种较为理想的抗鸭瘟病毒转移因子制备方法。

主权项

一种抗鸭瘟病毒特异性转移因子的体外制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：(1)无菌环境下采取鸡脾脏或鸡血，用鸡脾脏或外周血制备淋巴细胞单层。无菌静脉采取动物全血20‑30ml，加0.8％肝素溶液0.2m1抗凝，静置30‑60min，用带胶球吸管吸取红细胞层以上的所有血浆，特别是紧接红细胞层上的白细胞层要尽量吸取，分装于消毒离心管内，用PBS(pH为7.2)液反复洗涤2‑3次，离心速度800‑1200转/分，然后用含30％犊牛血清水解乳蛋白40ml进行白细胞培养，混合均匀后分装于容量100ml细胞培养瓶中，塞紧瓶塞，置37℃细胞培养箱中，经2‑3天，白细胞均匀贴壁，即制成淋巴细胞单层；(2)对所制备的淋巴细胞单层进行传代培养：显微镜下观察(1)中所制备的淋巴细胞单层，确认其生长状态良好即可进行细胞的传代培养；(3)病毒的提纯：将鸭瘟病毒接种于9‑10日龄的鸡胚尿囊腔内，37℃培养48‑120h增值病毒，将收集的尿囊液反复冻融三次后，超声破碎处理，离心，取沉淀，根据病毒粒子的大小利用密度梯度高速离心，得到较为纯正的病毒；(4)抗鸭瘟病毒特异性转移因子的制备：当传代的淋巴细胞长成单层后，用植物血凝素(终浓度为100mg/L)和鸭瘟病毒(终浓度为1000‑1500血凝单位/ml)诱导培养，离心培养2‑3天后，8000转/分、20‑30min离心细胞培养液，取上清液，将其置于4℃下磁力搅拌透析18‑24h，超滤除菌，即获得抗鸭瘟病毒特异性转移因子。