[发明专利]脐带组织块冻存方法

摘要

脐带组织块冻存方法，涉及一种脐带冻存方法。本发明是要解决目前脐带组织保存时间短，容易导致脐带组织细胞死亡的问题。方法：一、组织块的处理：在无菌工作台内，将脐带消毒处理，用生理盐水清洗，剪成段，剥离华通式胶，将华通式胶置于洁净的离心管内剪碎；二、向组织块中加入DMEM，重悬组织块后加入预冷冻存液，分装到冻存管中，采用程控降温仪降温，待细菌检测，微生物检测和病毒检测均为阴性后转入液氮中长期保存，即完成脐带组织块的冻存。本发明冻存并解冻后的组织块在培养瓶内直接接种贴壁存活率在98％以上，细胞生长较好，并且对冻存组织块培养后的细胞进行分化成骨实验，分化功能较强。由于保存脐带组织。

主权项

脐带组织块冻存方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、组织块的处理：在无菌工作台内，将脐带通过体积百分浓度75％的酒精消毒处理，然后用生理盐水清洗2次，将清洗后的脐带剪成长度为2～3cm的段，然后放在平皿内，剥离华通式胶，将华通式胶置于洁净的离心管内，用手术剪剪碎至1～2mm³的块状；二、组织块的冷冻：向组织块中加入DMEM，DMEM的体积为组织块体积的二分之一，重悬组织块后加入与DMEM等体积的预冷冻存液，然后按每管1mL分装到冻存管中，采用程控降温仪降温，具体为：先于4℃平衡30min，然后以1℃/min的速度降至‑5℃，接着以21℃/min的速度降至‑54℃，再以10℃/min的速度升温至‑21℃，然后以2℃/min的速度降至‑40℃，接着以10℃/min的速度降至‑80℃，最后于‑196℃过夜保存，待细菌检测，微生物检测和病毒检测均为阴性后转入液氮中长期保存，即完成脐带组织块的冻存。