[发明专利]一种脂肪间充质干细胞大规模培养方法

摘要

本发明公开了一种脂肪间充质干细胞大规模培养方法，选择非酶消化法(TrypLE)收集贴壁的脂肪间充质干细胞，使用最低的TrypLE用量，最大程度减少细胞消化过程中对细胞的损伤，并选择1.3×10⁴/cm²最佳接种密度培养细胞，使用无血清培养基(UltraCULTURE MEDIUM)，并在培养基中加入合适浓度的EGF,在φ15cm的培养皿中进行大规模的培养。进而将脂肪间充质干细胞的传代次数提高至15代以上仍然能保持原来的干性。从而大大满足间充质干细胞在科学研究与应用上的需求。

主权项

一种脂肪间充质干细胞大规模培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)待原代培养分离后的脂肪间充质干细胞融合度达到80‑90％，吸去细胞培养皿中培养液，向每个培养皿内加PBS进行清洗后，吸去培养皿中的PBS；2)消化：在培养皿加入tryplE，转移至CO₂培养箱孵育1‑2min后，加入无血清培养基，用巴氏吸管反复吹打10‑15次，待80‑90％的细胞不再贴壁，终止消化；3)离心：将步骤2得到细胞悬液转移至离心管中，1000rpm/min离心5min；4)计数：离心结束后，弃去上清液，用无血清培养基重悬细胞沉淀，吹打混匀，得到细胞悬液，取20μl用细胞计数仪计数；5)铺板及培养：将步骤(4)的细胞悬液接种到无血清培养基中，调整细胞密度为1.3×10⁴/cm²,加入无血清培养基，无血清培养基中添加EGF，EGF的浓度为10ng/ml；转移至CO₂细胞培养箱中进行培养。