[发明专利]卡那霉素适配体亲和柱的制备方法有效
申请号: | 201410724019.0 | 申请日: | 2014-12-04 |
公开(公告)号: | CN104383718A | 公开(公告)日: | 2015-03-04 |
发明(设计)人: | 廖且根;罗林广;胡丽芳;王冬根 | 申请(专利权)人: | 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 |
主分类号: | B01D15/38 | 分类号: | B01D15/38;B01J20/281;G01N1/34 |
代理公司: | 江西省专利事务所 36100 | 代理人: | 胡里程 |
地址: | 330200 江*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | 本发明公开一种卡那霉素适配体亲和柱的制备方法,属于亲和层析和兽药残留分析领域。采用环氧活化琼脂糖微球FF作为固相载体,与氨基修饰卡那霉素适配体偶联后,封闭载体中多余活性位点,填入微型小柱制成。所制备的适配体亲和柱能够和卡那霉素特异性结合,其加标回收率在90~100之间,至少可以重复使用五次。 | ||
搜索关键词: | 卡那霉素 适配体 亲和 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种卡那霉素适配体亲和柱的制备方法,其步骤:(1) 活化:取60mg的环氧活化琼脂糖微球FF在2.0mL去离子水中悬浮溶胀成凝胶1小时,用60mL去离子水分三次洗涤凝胶,静置5min后,移除清洗液;(2) 偶联:将氨基修饰的卡那霉素适配体溶于1mL20.0mmol/LpH10.0的磷酸盐缓冲液中,将步骤(1)溶胀凝胶悬浮于含适配体的缓冲液中,在37℃的水浴中振摇16小时,反应完后,再用3mL去离子水洗涤未反应的适配体,静置5min后,移除清洗液;(3) 封闭:将步骤(2)凝胶悬浮到2mL1mol/LpH8.0乙醇胺溶液中,在50℃的水浴中振摇4小时,反应完后,用3mL含0.5mol/LNaCl的0.1mol/LpH4.0乙酸缓冲液和3mL含0.5mol/LNaCl的pH8.3偶联缓冲液交替清洗,每次清洗2min,至少循环3次;(4) 装柱:将步骤(3)的悬浮凝胶液移入固相萃取小柱,避免产生气泡,用5mL0.1mol/LpH8.0磷酸盐缓冲液平衡小柱。
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