[发明专利]一种用于检测PIK3CA基因突变的试剂盒

摘要

本发明适用于生物技术以及医学领域，涉及一种PIK3CA基因突变检测试剂盒。本发明的第1-5号试剂依次针对PIK3CA基因的E542K、E545K、E545D、H1047R和H1047L突变，第6号试剂针对PIK3CA基因的保守区，用作质控，检测方法利用上述检测试剂盒通过荧光定量PCR反应进行。本发明实施例提供的检测试剂盒灵敏度高，特异性好，是一种性能优良的人类PIK3CA基因突变检测试剂盒。本发明采用荧光定量PCR方法对PIK3CA基因突变区域序列进行特异性扩增检测，同时利用MGB阻断核酸与待测样品中野生型DNA模板特异结合，抑制该野生型DNA模板与引物探针的结合。采用了降低引物Tm值、5’端加尾和在引物中间加入插入碱基等方法设计正向引物，提高试剂盒特异性，再引入45个以上的循环数，从而达到提高试剂盒灵敏度的效果。

主权项

一种用于检测受试者中PIK3CA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括分开设置的第1‑6号试剂，并且：a.第1号试剂包含序列为SEQ ID NO:1的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A；b.第2号试剂包含序列为SEQ ID NO:4的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A；c.第3号试剂包含序列为SEQ ID NO:5的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物、探针A和MGB阻断核酸C；d.第4号试剂包含序列为SEQ ID NO:7的正向引物、序列为SEQ ID NO:8的反向引物和探针B；e.第5号试剂包含序列为SEQ ID NO:10的正向引物、序列为SEQ ID NO:8的反向引物和探针B；f.第6号试剂包含序列为SEQ ID NO:11的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A；其中探针A由序列为SEQ ID NO:3的核酸、该核酸的5’端连接的荧光报告基团和该核酸的3’端连接的荧光淬灭基团组成；探针B由序列为SEQ ID NO:9的核酸、该核酸的5’端连接的荧光报告基团和该核酸的3’端连接的荧光淬灭基团组成；所述的MGB阻断核酸C的核酸序列为SEQ ID NO:6，其包括MGB基团修饰，且3’端脱氧核糖核苷酸骨架上的3’羟基被封闭；优选地，所述的受试者是人类癌症患者；进一步优选地，所述的受试者是采用了PI3K抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)等PI3K通路相关靶向药物治疗的人类癌症患者。