[发明专利]一种同时检测BP、MBV、HPV的三色荧光定量PCR联合检测方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种同时检测BP、MBV、HPV的三色荧光定量PCR联合检测方法及其试剂盒。本发明检测试剂盒含有特异性引物和探针，通过反应体系和条件的优化，一次试验可同时高灵敏、高特异地检测出BP、MBV和HPV，具有很好的特异性、敏感性和重复性；可特异性地检测BP、MBV和HPV，与中肠腺坏死杆状病毒、HPV、WSSV、IHHNV等病毒的不发生交叉反应；检测限达103拷贝/µl；重复性较好；本发明的检测方法是BP、MBV和HPV病毒快速初筛及初步确认定型的良好方法。

主权项

一种同时检测对虾杆状病毒、斑节对虾杆状病毒、肝胰腺细小病毒的三色荧光定量PCR联合检测试剂盒，包括如下成分：多色荧光定量PCR MIX、病毒核酸提取液、热启动Taq酶阳性质控品、阴性质控品，其特征在于：所述多色荧光定量PCR MIX中含有同时检测对虾杆状病毒、斑节对虾杆状病毒、肝胰腺细小病毒的的特异性引物及探针，序列分别为：对虾杆状病毒的上游引物：BP‑F：5’‑ AACCTGACCTCCTCCAAACTTTTA ‑3’（SEQ ID NO：1）；下游引物：BP‑R：5’‑ CCCAAAATTCTAGAGCCTCCAA ‑3’（SEQ ID NO：2）；荧光探针：BP‑P：5’‑ TCAGGCTGGACCAGATGTCCCAAAA ‑3’（SEQ ID NO：3）；斑节对虾杆状病毒的上游引物：MBV‑F：5’‑ TTGCTCCAAAAAGAGTTCTTCCA ‑3’（SEQ ID NO：4）；下游引物：MBV‑R：5’‑ AAGGGTGTATGCTAGCCTATGGTAGT ‑3’（SEQ ID NO：5）；荧光探针：MBV‑P：5’‑ CATTTCCTTTATATTCCAATCGCGTCTGCG ‑3’（SEQ ID NO：6）；肝胰腺细小病毒的上游引物：HPV‑F：5’‑CTGGAGTAAAAGTAGCAAGAGGGTTT‑3’（SEQ ID NO：7）；下游引物：HPV‑R：5’‑AGTCTTGCCATAGTTGCTTGTTGT‑3’（SEQ ID NO：8）；荧光探针：HPV‑P：5’‑TCCGAGGCTACGAGAAGATCCTGCAAC‑3’（SEQ ID NO：9）。