[发明专利]一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统

摘要

本发明提供了一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统。此递药系统为脂质混合PLGA纳米粒，该纳米粒内核为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，表面插入AA-聚乙二醇-胆固醇连接物和三苯基膦-胆固醇连接物，并将阿霉素(DOX)包裹于脂质混合PLGA纳米粒中得到载药纳米粒。此递药系统具有酸敏特性，能够主动识别肿瘤细胞，可将阿霉素同时定位释放于肿瘤细胞线粒体和细胞核，增强抗肿瘤活性，并逆转肿瘤耐药，为提高阿霉素疗效提供新策略。

主权项

一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统，其特征是递药系统是脂质混合PLGA纳米粒，纳米粒的核为聚乳酸‑羟基乙酸共聚物(PLGA)，表面嵌入对甲氧基苯甲酰胺‑聚乙二醇‑胆固醇连接物(AA‑PEG‑hyd‑CHEMS)和三苯基膦‑胆固醇连接物，其中(1)对甲氧基苯甲酰胺‑聚乙二醇‑胆固醇连接物(AA‑PEG‑hyd‑CHEMS)的制备方法是：称取氨基己酸溶解于无水二氯甲烷中；另称取对甲氧基苯甲酰氯溶于无水二氯甲烷中，缓慢加入到上述反应液中，搅拌反应12小时后停止反应，真空旋转蒸干反应液；用适量乙酸乙酯溶解反应物，加入0.5M的盐酸溶液洗涤，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤除去硫酸钠，蒸干有机相，硅胶色谱柱纯化得到对甲氧基苯甲酰胺基己酸；将N,N‑二环己基碳二亚胺和4‑二甲胺基吡啶(DCC/DMAP)溶于二氯甲烷中，加入对甲氧基苯甲酰胺基己酸，活化6小时后加入末端经氨基修饰的聚乙二醇(NH₂‑PEG‑NH₂)，同时加入适量三乙胺，继续反应12小时后停止反应，过滤，蒸干反应液。向反应物中加入适量甲醇，透析，冻干得到AA‑PEG‑NH2；另称取适量乙酰基苯甲酸，溶于二氯甲烷，加入DCC/DMAP，反应液活化6小时后加入AA‑PEG‑NH₂，同时加入适量三乙胺，反应结束后，过滤，蒸干反应液，用适量甲醇重新溶解产物，透析，冻干，得到AA‑PEG‑对乙酰基苯甲酸；称取胆固醇溶解于二氯甲烷中，依次加入丁二酸酐、DMAP、三乙胺，室温搅拌反应；反应结束后，硅胶色谱柱纯化得到胆固醇‑琥珀酸单酯(Chol‑suc)；将Chol‑suc、DCC、DMAP溶解于二氯甲烷中，活化6小时后加入肼基甲酸叔丁酯(BOC‑NH‑NH₂)和三乙胺，反应结束后用硅胶色谱柱纯化得到胆固醇‑琥珀酸‑NHNHBOC；将上述产物溶于二氯甲烷，加入三氟乙酸，常温反应2小时，反应结束后加入水相洗去三氟乙酸，再用二氯甲烷萃取反应液，收集有机相，干燥、蒸干得到胆固醇‑琥珀酰肼(Chol‑NHNH₂)；称取AA‑PEG‑对乙酰基苯甲酸以及Chol‑NH‑NH₂溶于二氯甲烷中，加入少量三氟乙酸，搅拌反应，反应结束后，蒸干反应液，用少量甲醇溶解，透析冻干得到具有酸敏特性的终产物对甲氧基苯甲酰胺‑聚乙二醇‑胆固醇连接物(AA‑PEG‑hyd‑CHEMS)；(2)三苯基膦‑胆固醇连接物(TPP‑CHEMS)的制备方法是：将(3‑丙羧基)三苯基溴化膦与DCC/DMAP溶于二氯甲烷中，活化6小时后加入己二胺，反应24小时后停止反应，过滤，蒸干反应液，硅胶柱层析纯化得到中间体；另取胆固醇‑琥珀酸单酯溶于二氯甲烷中，加入DCC/DMAP活化6小时后加入上述中间体，反应24小时后停止反应，过滤，蒸干反应液，硅胶柱层析纯化得到三苯基膦‑胆固醇琥珀酸酯(TPP‑CHEMS)；(3)脂质混合PLGA纳米粒的制备方法是：称取一定量的PLGA、TPP‑CHEMS与AA‑PEG‑hyd‑CHEMS溶于二氯甲烷中(V₁)，另将盐酸阿霉素溶于蒸馏水中(V₂，V₁≥V₂)，混合上述液体，超声，再加入3％的聚乙烯醇(PVA，V₃，V₃≥V₁)，超声，转移到烧杯中，室温搅拌3h，离心(15000rpm,15min)，得到的沉淀用蒸馏水冲洗三次，用蒸馏水重新分散，即得纳米粒。