[发明专利]猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的制备方法，首先自制疫苗，将无菌采集发病猪的肺脏、肝脏和脑及淋巴结组织，用l000U/mL的双抗液冲洗表面后按1：2的比例加入20％铝胶生理盐水，再处理制成疫苗；然后对蛋鸡肌注猪圆环病毒2型自家组织灭活疫苗制备高免卵黄抗体。本发明是自治猪圆环病毒2型组织灭活苗，免疫鸡，收集高免卵后制备卵黄抗体，用于治疗发病猪，通过临床验证，效果良好。

主权项

一种猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，自制疫苗：（1）先配制0.8％甲醛、0.1％叠氮钠和l000 U/mL双抗液备用；（2）再将无菌采集发病猪的肺脏、肝脏和脑及淋巴结组织，用 l000 U/mL的双抗液冲洗表面；除掉筋膜，切成小块；（3）组织称重后按1：2的比例加入 20％铝胶生理盐水，在高速匀浆机中匀浆 2～3 min，超声波裂解10min～15min，再以2000 r／min匀浆 4～5 min，加入铝胶生理盐水，加入生理盐水的总量为组织重量的四倍；（4）在无菌室内，用灭菌纱布过滤、分装，最后进行灭活；（5）向匀浆后的组织液中加入等量的0.8％甲醛，O.l％叠氮钠，在冰箱冷冻室反复冻融3次以上，室温放置12h后，于4℃冷藏保存；（6）经无菌检查、安全试验、效力试验后，4℃冷藏保存；第二步，制备高免卵黄抗体：（1）基础免疫每羽蛋鸡肌注猪圆环病毒2型自家组织灭活疫苗0.2mL；（2）在基础免疫后l5天，每羽蛋鸡肌注猪圆环病毒2型自家组织灭活疫苗0.3mL,加强免疫；（3）在加强免疫后l5天，每羽蛋鸡肌注猪圆环病毒2型自家组织灭活疫苗0.4mL,强化免疫；（4）强化免疫后 15天抽检卵黄，抗体效价最低达 1:128，用于制作卵黄抗体；（5）采集强化免疫后第15～30天所产鸡蛋作为高免蛋,擦去鸡蛋表面脏物,浸泡于0.1％浓度的新洁尔灭溶液中30min后晾干；（6）用75％酒精棉球进行蛋壳表面消毒,无菌操作打开蛋壳,倒净蛋清,将蛋黄倒入消毒玻璃烧杯内备用；（7）将卵黄和灭菌生理盐水按1:4比例稀释,将卵黄和灭菌生理盐水按1:4比例稀释，调pH值至7.4，加入1.2%硫酸葡聚糖，静置，离心，取澄清液，进行硫酸铵分级得到卵黄抗体,除菌过滤，然后加入0.O1％硫柳汞,分装加塞,冰冻备用。