[发明专利]一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法在审
申请号: | 201410784351.6 | 申请日: | 2014-12-16 |
公开(公告)号: | CN104450786A | 公开(公告)日: | 2015-03-25 |
发明(设计)人: | 庞建新;邬贤;丘玉昌;曹莹;谢宝平;周平正;王杞妹;陈嘉盛;李红卫 | 申请(专利权)人: | 南方医科大学 |
主分类号: | C12N15/861 | 分类号: | C12N15/861;C12N15/66;A61P35/00 |
代理公司: | 广州市天河庐阳专利事务所 44244 | 代理人: | 胡济元 |
地址: | 510515 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明涉及一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法,该方法由以下步骤组成:(1)取如SEQ ID NO.1所示的N端带有6个his标签的人端粒酶C端第936-1132片段的编码序列,经双酶切、连接反应克隆至含有绿色荧光蛋白基因GFP的穿梭质粒中,得到重组穿梭质粒;(2)将得到的重组穿梭质粒进行PmeⅠ酶切线性化,通过与骨架质粒PAdEasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到重组腺病毒质粒;(3)将得到的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞进行重组包装,收集具有绿色荧光的细胞,得到细胞包装的重组腺病毒;(4)将得到细胞包装的重组腺病毒采用氯化铯梯度离心法进行纯化,得到重组腺病毒载体。本方法所得到的重组腺病毒载体不仅可抑制肿瘤细胞增殖,而且起效快。 | ||
搜索关键词: | 一种 抑制 肿瘤 细胞 增殖 重组 病毒 载体 构建 方法 | ||
【主权项】:
一种抑制肿瘤细胞增殖的重组腺病毒载体的构建方法,该方法由以下步骤组成:(1)取如SEQ ID NO.1所示的N端带有6个his标签的人端粒酶C端第936‑1132片段的编码序列,经双酶切、连接反应克隆至含有绿色荧光蛋白基因GFP的穿梭质粒中,得到重组穿梭质粒;(2)将得到的重组穿梭质粒进行Pme Ⅰ酶切线性化,通过与骨架质粒PAdEasy‑1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到重组腺病毒质粒;(3)将得到的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞进行重组包装,收集具有绿色荧光的细胞,得到细胞包装的重组腺病毒;(4)将得到细胞包装的重组腺病毒采用氯化铯梯度离心法进行纯化,得到重组腺病毒载体。
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