[发明专利]一种用于监测血管重构现象的方法与试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于监测血管重构现象的方法，以及涉及相应的用于监测血管重构现象的试剂盒。本发明所述方法是将体外培养的血管平滑肌细胞进行因素处理而制备成细胞爬片；或者将血管组织制备成石蜡切片；用稀释的细胞核增殖抗原Ki67覆盖，染色，荧光显微镜观察。本发明突破了传统上对于血管重构现象只监视细胞增殖或者只监视细胞凋亡的方法，首次提出了一种新的用于监控血管重构现象的方法，同时对细胞增殖和细胞凋亡进行观察，能够更有效地对移植血管的病理生理变化进行干预研究。本发明所述试剂盒特异性高，适用于基础与临床研究中体外培养细胞爬片、细胞涂片和各类组织切片中的组织细胞同时出现细胞增殖、凋亡以及静息情况研究。

主权项

1.一种用于监测血管重构现象的方法，包括以下步骤：A.体外培养的血管平滑肌细胞进行因素处理而制备成细胞爬片；B.用清洗液清洗，加入固定液覆盖染色标本，置于‑20℃固定10分钟；C.用清洗液清洗，加入脱膜液覆盖染色标本，20‑25℃孵育10分钟；D.用清洗液清洗，加入封闭液覆盖染色标本，置于湿盒中孵育30分钟；E.用含1％BSA的PBS缓冲液稀释细胞核增殖抗原Ki67，稀释浓度为1：200，将稀释好的液体覆盖染色标本，置于湿盒中4℃孵育过夜；F.用清洗液清洗，加入Cy3标记荧光二抗，参考稀释浓度为1：200，置于湿盒内室温孵育2小时；G.用清洗液清洗，加入预先配制的体积比为1：9的凋亡酶试剂和凋亡标记试剂，20‑25℃保持1小时；H.用稀释浓度为1：200的细胞核复染试剂进行复染，20‑25℃染色10分钟，用清洗液清洗；I.甘油封片，荧光显微镜观察。