[发明专利]一种柴胡脱毒组培快繁的方法

摘要

本发明公开了一种柴胡脱毒组培快繁的方法，包括如下步骤：选择生长健壮，无病虫害，籽粒饱满当年采收的新种子，先把种子放到55℃的水中不断搅拌至室温，把漂在上面的秕籽捞去，然后洗净沉底的饱满籽粒，再经75％酒精浸泡0.5～l.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌20～30min，最后用无菌水冲洗3～5次后作为外植体；然后经过诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽以及病毒检测后，大量繁殖脱毒组培苗和脱毒株芽。与现有柴胡育苗方法相比，本发明的优点是：接种污染率低、移栽成活率高，药材品质高。

主权项

一种柴胡脱毒组培快繁的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基，各培养基的组分重量为：①基本培养基：选用MS培养基，蔗糖25～35g/L，琼脂7～9g/L，蛋白胨3～8g/L，腐殖酸0.5～0.8g/L，pH 5.8～6.5；②诱导培养基：MS中添加6‑BA 0.5～1.5mg/L、α‑萘乙酸钠0.1～0.2mg/L、NAA 0.15～0.5mg/L以及维生素B2 0.001～0.002mg/L；③愈伤组织分化培养基：MS中添加6‑BA 2.5～3.0mg/L和NAA 0.2～0.3mg/L以及维生素B2 0.001～0.002mg/L；④增殖培养基：MS中添加6‑BA l.0mg/L和NAA O.3mg/L；⑤生根培养基：1/3MS中添加NAA O.1mg/L和卡拉胶0.5～0.8g/L；2)外植体的选取与灭菌：取柴胡的种子，经灭菌处理，作为脱毒组培用的外植体；3)诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的种子接种在诱导培养基上，直接形成无根组培苗或先形成愈伤组织，再将愈伤组织移植至分化培养基诱导出丛芽，形成无根组培苗和珠芽；4)增殖培养：将步骤3)直接形成的无根组培苗或先形成愈伤组织，再经分化培养基诱导形成的无根组培苗和珠芽接种在增殖培养基上，诱导出丛芽，形成无根组培苗和珠芽；5)生根培养：将步骤4)增殖形成的无根组培苗和珠芽接种在生根培养基中进行生根培养；6)移栽：当步骤5)的生根组培苗生长至4～7cm以上、生根珠芽0.3～0.7cm以上，移栽基质培养至成苗；7)病毒检测：利用RT‑PCR扩增技术，构建其基因组序列克隆，原核表达制备病毒特异性的抗血清，建立ELISA检测技术进行柴胡大豆花叶病毒、芋花叶病毒、马蹄莲花叶病毒的检测。