[发明专利]一种从刀豆中提取尿素酶的方法

摘要

本发明提供一种从刀豆中提取尿素酶的方法，主要解决了现有技术中工艺复杂，产品的失活率高，回收率低，不适合工业化生产。该从刀豆中提取尿素酶的方法包括以下步骤1]提取；2]沉降；3]中和；4]微滤；5]超滤。该方法工艺简单，易操作，可有效地降低产品的失活率，且成本低，污染小，样品回收率高，有利于工业化生产。

主权项

一种从刀豆中提取尿素酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1]提取向刀豆粉中加入浓度为0.05‑0.2M缓冲液常温搅拌提取0.5‑2h，离心，收集上清液；所述缓冲液内含质量浓度30％的丙酮、1mM EDTA和1mM巯基乙醇；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、BTP缓冲液或Tris‑HCl缓冲液；所述缓冲液的pH为6.8‑7.5；所述缓冲液的投料量为刀豆粉末的3‑10倍量；2]沉降向步骤1所得的上清液中加入酸性试剂，调节pH至5.8‑6.2，冷藏，离心，然后收集上清液，继续用同一酸性试剂调节上清液pH至4.8‑5.2，再冷藏，收集沉淀；所述酸性试剂为盐酸、柠檬酸或醋酸；3]中和向步骤2所得沉淀中加入浓度为0.01‑0.1M与步骤1相同的缓冲液中和，然后离心处理，继续加入同一缓冲溶液进行二次中和，离心，收集清液；所述步骤3中缓冲液的pH为7.2‑8.0；4]微滤将步骤3所得清液用陶瓷膜微滤，再加入清液0.2‑0.4倍量的蒸馏水或浓度为0.01M与步骤1相同的缓冲液进行透析，收集透过液和透析液；所述的陶瓷膜孔径为500‑1200nm；5]超滤将步骤4所得的透过液和透析液用截留分子量在80‑200KDa的有机膜进行超滤，同时用浓度为0.01‑0.1M与步骤1相同的缓冲液进行等流量透析，收集浓缩液，然后冷冻干燥，既得尿素酶；所述步骤5中缓冲液用量为透过液和透析液总质量的2‑5倍；所述有机膜为PP膜、PES膜、PAN膜或PVDF复合膜。