[发明专利]一种新的基于LC-MS/MS的精氨酸测定方法

摘要

本发明公开了一种新的基于LC-MS/MS的精氨酸测定方法，该方法是利用特定衍生化试剂和LC-MS/MS，对衍生化后精氨酸产物进行精确定量检测方法，通过本发明方法可以使得质谱响应值提高10倍以上并且衍生化反应时间短，10分钟内反应完全，反应无毒、高效；产物在通用C18分析柱上保留较好，利于分析，反应剩余的PEITC易于挥发除去，并且碳链较长，不会损伤分析柱；分析范围为100 pg/mL～1ug/mL四个数量级。

主权项

一种新的基于LC‑MS/MS的精氨酸测定方法，该方法是利用特定衍生化试剂和LC‑MS/MS，对衍生化后精氨酸产物进行精确定量检测方法，其特征是具体步骤如下：步骤一：精确称取2.0 mg精氨酸，用2.0 mL超纯水配制终浓度为1mg/mL的精氨酸储备液；再使用移液器吸取10μL的精氨酸储备液，加入到990μL的超纯水中，制备得到10μg/mL的精氨酸的工作溶液，取5μL的该工作液，加入到95μL新鲜采集的SD大鼠空白血浆内，振荡器上涡旋20秒使之混匀，此时血浆内精氨酸浓度为500ng/mL；步骤二：向上述血浆内加入300μL的乙腈，振荡器上剧烈振荡后，常温下，使用离心机，转速设定为13000rpm，离心5分钟，用移液器转移170μL上清液进入新1.5mL的EP管；步骤三：精确称取2.0 mg苯乙基异硫氰酸酯，用2.0 mL二甲基亚砜配制1mg/mL的苯乙基异硫氰酸酯储备液，再吸取50 μL苯乙基异硫氰酸酯储备液用950 μL纯乙腈稀释，配制成50 μg/mL的衍生化工作液； 步骤四：取步骤三中制备的衍生化工作液10 μL，加入到步骤二中的含有170 μL上清液的1.5 mL EP管内，振荡器上涡旋5秒使之混匀，最后加入催化剂无水乙醇20 μL，该无水乙醇含0.1%甲酸作为响应增强剂，振荡器上涡旋5秒使均匀；室温静置10分钟，样品转入1.5mL 液相色谱玻璃进样品，即可分析。