[发明专利]转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组和方法

摘要

本发明公开一种转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组和方法。本发明将多重PCR、巢式PCR、荧光定量PCR结合起来，对引物的设计进行了严格的控制，并对检测流程进行了改进，建立了一套多重巢式荧光定量PCR检测体系，该体系能够定量检测转基因大豆GTS40-3-2品系，以及常见外源基因NOS终止子、CP4-EPSPS、CaMV35S启动子和大豆内源基因Lectin，该方法灵敏度相比普通荧光定量PCR提高了1个数量级。本发明的方法具有模板需要量少，灵敏度高，通量高，特异性强等优点；能应用于转基因的快速定量检测，为快速、准确、高通量、定量检测转基因提供新方法。

主权项

转基因大豆GTS40‑3‑2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组，其特征在于：包括大豆内源基因lectin外引物、大豆内源基因lectin内引物、品系特异性RRS外引物、品系特异性RRS内引物、CaMV35S启动子外引物、CaMV35S启动子内引物、NOS终止子外引物、NOS终止子内引物、CP4‑EPSPS外引物和CP4‑EPSPS内引物，其核苷酸序列分别如下所示：lectin外引物的上游引物：AGTCGTCGCTGTTGAGTTTGA；lectin外引物的下游引物：ACCCACTCGGGAAGAGAAGTC；lectin内引物的上游引物：TGCCTCCACCAGCCTCTT；lectin内引物的下游引物：AGTCTTCAAATCGACCACATCG；RRS外引物的上游引物：ACCAGTGACCCTAATAGGCAACA；RRS外引物的下游引物：TGCGTGGTGAACTTTCTGTTGG；RRS内引物的上游引物：ACCAGTGACCCTAATAGGCAACA；RRS内引物的下游引物：AGTTCTTCTCCGATCCCAAATAG；CaMV35S启动子外引物的上游引物：ATTGATGTGATATCTCCACTGACGT；CaMV35S启动子外引物的下游引物：CCTCTCCAAATGAAATGAACTTCCT；CaMV35S启动子内引物的上游引物：TCTCCACTGACGTAAGGGATGA；CaMV35S启动子内引物的下游引物：GAAGGGTCTTGCGAAGGATAG；NOS终止子外引物的上游引物：TGCCGGTCTTGCGATGA；NOS终止子外引物的下游引物：AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC；NOS终止子内引物的上游引物：TGCCGGTCTTGCGATGA；NOS终止子内引物的下游引物：CCCATCTCATAAATAACGTCATGC；CP4‑EPSPS外引物的上游引物：GTTGCGGCCCTGCTTGT；CP4‑EPSPS外引物的下游引物：CAGCGTGGAGGAGCGAAC；CP4‑EPSPS内引物的上游引物：CCGACATCGAAGTCATCAACC；CP4‑EPSPS内引物的下游引物：CAGCGTGGAGGAGCGAAC。