[发明专利]一种利用离子交换纤维固定化果糖基转移酶的制备方法

摘要

一种利用离子交换纤维固定果糖基转移酶制备方法，是利用弱碱性阴离子交换纤维为载体把液态游离果糖基转移酶固定化于载体上，使用固定化果糖基转移酶活力能够长期保存且能的重复长期使用。本发明包括两部份技术内容，利用生物溶菌酶制备液态游离果糖基转移酶和利用离子交换纤维固定化果糖基转移酶；米曲霉发酵培养得大量菌体，经洗涤、利用纤维酶溶解菌体、提取游离酶液、用离子交换纤维固定化果糖基转移酶，所得制得固定化酶活力≥180U/g、半衰期≥40次，转化蔗糖转化率≥90%，转化蔗糖生成低聚果糖含量55～60%。与目前公开技术相比具有酶提取简洁、操作时间短、容易再生利用、固定化过程不使用交联剂、产品质量安全性高等优点。

主权项

一种利用离子交换纤维固定化果糖基转移酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）高含果糖基转移酶菌丝体制备：经米曲霉（Aspergillus oryzae）大量发酵得到菌丝体，经分离洗涤得到干净菌丝体；（2）游离果糖基转移酶液制备：将步骤（1）制得的干净菌丝体置于搅拌罐内，添加2～4倍（W/W）重量的纯化水和1.5～2%(W/W)的活力为10～15万U/g固定化纤维酶，反应5～8h,离心分离取液体得到游离果糖基转移酶；（3）固定化载体处理：选用粒度均匀的离子交换纤维，用食品级乙醇处理40～60min,然后用纯化水洗涤2～4次后备用;（4）固定化吸附: 将步骤（2）得到的游离果糖基转移酶添加至固定化反应罐内并同时加入定量的离子交换纤维，吸附2～3h，过滤取固体物得到固定化果糖基转移酶；（5）冷藏稳定吸附提升固定化：将步骤（4）所得固定化果糖基转移酶置于2～5℃冷库内保存4～6h,纯化水冲洗3～4次，即得到高活性固定化果糖基转移酶。