[发明专利]生物物质的实时定量及定性分析方法

摘要

本发明涉及生物物质的实时定量及定性分析方法，尤其涉及在同一个空间内合并进行实时聚合酶链反应(PCRPolymerase Chain Reaction)及DNA微阵列而能够进行生物物质的实时定量及定性分析的方法。

主权项

一种生物物质的实时定量及定性分析方法，包括如下步骤：(a)准备生物物质检测用元件，该生物物质检测用元件包括上部形成有开口部的反应容器和通过所述开口部而可装卸于所述反应容器的元件部，其中所述元件部包括结合于所述反应容器的开口部的盖和朝所述盖的下部延伸而形成的杆，所述杆具有表面固定有第三探针的生物芯片；(b)向所述反应容器内添加包含第一探针‑第二探针复合体、正向引物、反向引物、碱磷酸去氧核苷酸、具有外切核酸酶活性的聚合酶、包含靶基因的样本及缓冲溶液的反应溶液，其中，所述第一探针包含互补于所述样本内靶基因的核酸序列的寡核苷酸序列，且包含能够产生第一荧光信号的第一荧光体和能够猝灭所述第一荧光体的第一猝灭体，所述第二探针包含互补于所述第三探针的寡核苷酸序列，而不包含互补于所述样本内靶基因的核酸序列的寡核苷酸序列，所述正向引物及所述反向引物是为了扩增所述样本内靶基因而包含互补于所述靶基因的核酸序列的寡核苷酸序列的引物；(c)进行包含所述样本内靶基因的变性反应、所述样本内靶基因和所述复合体、所述正向引物及所述反向引物的杂化反应以及由具有外切核酸酶活性的聚合酶引起的所述引物的延长反应的聚合酶链反应，其中，通过所述杂化反应而仅在所述靶基因和所述复合体中的所述第一探针之间进行杂化反应，在进行由具有外切核酸酶活性的聚合酶引起的延长反应的期间，从所述复合体分解并释放所述第二探针及所述第一荧光体；(d)被释放的所述第二探针和固定于所述生物芯片的所述第三探针进行杂化之后通过所述聚合酶而所述第二探针在所述第三探针上延长，其中，所述第三探针包含能够产生第二荧光信号的第二荧光体和能够猝灭所述第二荧光体的第二猝灭体，随着所述第二探针在所述第三探针上延长，第二猝灭体从所述第二荧光体分开而产生发光；以及(e)检测由所述第一荧光体引起的第一荧光信号以及由所述第二荧光体引起的第二荧光信号。