[发明专利]DNA构建体和制备具有条件突变型Acvr1等位基因的小鼠的方法

摘要

提供了包含含有突变的外显子的条件Acvr1等位基因的经遗传修饰的小鼠，其在诱导后转化成突变型外显子表型，其中突变型外显子表型包括异位骨形成。提供了包含侧翼连接有位点特异性重组酶识别位点的以反义方向排列的突变型Acvr1外显示子5的小鼠，其中所述小鼠还包含识别位点特异性重组酶识别位点的位点特异性重组酶，其中所述重组酶在小鼠暴露于他莫西芬后被诱导。在暴露于他莫西芬后，所述重组酶被表达并作用于RRS‑侧翼连接的突变型外显子5，以及以有义方向放置突变型外显子5并且缺失野生型外显子。

主权项

一种DNA构建体，其中所述构建体包含处于有义方向的野生型的具有功能的Acvr1外显子5，其中所述野生型的具有功能的Acvr1外显子5的上游和下游侧翼连接有第一重组酶识别位点，以及包含含有编码R206H的突变的突变型Acvr1外显子5，其中所述突变型Acvr1外显子5处于反义方向并且所述突变型Acvr1外显子5的上游和下游侧翼连接第二重组酶识别位点，其中所述第一重组酶识别位点和所述第二重组酶识别位点被定向从而使得在所述DNA构建体与小鼠的基因组重组生成经修饰的Acvr1等位基因后，重组酶可作用于所述第二重组酶识别位点以指导所述突变型外显子5至有义方向的倒转，并在此后指导所述经修饰的Acvr1等位基因中所述野生型的具有功能的Acvr1外显子5的缺失，剩下经转化的经修饰的Acvr1等位基因，所述经转化的经修饰的Acvr1等位基因包含倒转至有义方向的所述突变型Acvr1外显子5，所述突变型Acvr1外显子5侧翼连接有不相容的第一重组酶识别位点和第二重组酶识别位点，其中所述经转化的经修饰的Acvr1等位基因能够被表达以赋予异位骨化表型。