[发明专利]真核生物中的靶向基因组工程

摘要

本发明提供，通过使用双链断裂诱导酶例如TALEN和用于修复该双链断裂的供体分子、在预定位点靶向修饰真核细胞基因组的改进方法和手段。

主权项

一种用于在预选位点修饰真核细胞的基因组的方法，该方法包括步骤:a.通过如下方式在所述细胞的基因组中在位于双链DNA断裂诱导(DSBI)酶的识别位点或附近的切割位点处诱导双链DNA断裂(DSB)，其中所述方式为在所述细胞中表达识别所述识别位点并在所述切割位点诱导DSB的DSBI酶；b.在所述细胞中引入修复核酸分子，其中所述修复核酸分子包含与所述预选位点的上游区域具有同源性的上游侧翼区和/或与所述预选位点的下游DNA区域具有同源性的下游侧翼区，以允许在所述一个或两个侧翼区和位于所述预选位点侧翼的所述一个或两个DNA区之间同源重组；c.选择在所述预选位点所述基因组被修饰的细胞，其中所述修饰选自：i.至少一个核苷酸的替代；ii.至少一个核苷酸的缺失；iii.至少一个核苷酸的插入；或iv.i.‑iii.的任何组合,该方法的特征在于，所述预选位点位于所述切割和/或识别位点之外。