[发明专利]用于产生用于定向进化的文库的方法在审
| 申请号： | 201480023547.1 | 申请日： | 2014-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN105283588A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | M.维纳;M.基斯 | 申请（专利权）人： | 艾希奥美公司 |
| 主分类号： | C40B10/00 | 分类号： | C40B10/00;C40B40/00;C40B40/06;C40B50/06 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 翟建伟;彭昶 |
| 地址： | 美国康*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本文公开的是生成例如可以用于定向进化中的目的序列的变体文库的有效方法，在一个实施方案中，该方法包括扩增反应，例如易错PCR，以生成目的序列的双链DNA(dsDNA)变体，这之后dsDNA变体的一条链可以选择性降解，以产生单链DNA(ssDNA)变体。ssDNA变体可以与ssDNA中间体例如尿嘧啶化的环状ssDNA中间体杂交，以形成异源双链DNA，其可以转化到细胞例如大肠杆菌细胞内，获得变体文库。这种方法消除无效的亚克隆步骤和由许多现有方法要求的昂贵引物组的需要。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 产生 定向 进化 文库 方法 | ||
【主权项】：
生成目的序列的变体文库的方法，所述方法包括下述步骤：(a)提供包含所述目的序列的模板DNA分子；(b)提供一对寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与所述目的序列的相反链杂交，其中所述寡核苷酸之一是受保护的，另一寡核苷酸是未受保护的，并且所述寡核苷酸侧接所述目的序列；(c)使用所述寡核苷酸对所述模板DNA分子进行扩增反应，从而生成dsDNA变体群体；(d)使所述dsDNA变体群体与酶一起孵育，所述酶能够相对于所述dsDNA变体的受保护链选择性降解未受保护的链，从而产生ssDNA变体群体；(e)使所述ssDNA变体群体与ssDNA中间体杂交，其中所述ssDNA中间体包含与所述目的序列或其片段基本上相同的序列，生成异源双链DNA；和(f)将所述异源双链DNA转化到细胞内，从而生成所述目的序列的变体文库。
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