[发明专利]采用寡核苷酸介导的基因修复提高靶向基因修饰的效率的方法和组合物

摘要

本发明提供用于修饰植物细胞以及源自其的植物和种子中的基因的改进方法。更具体地说，本发明涉及通过组合基因修复寡核苷酸与增强靶细胞基因修复机制的组分的可用性的方法来增加靶基因突变的效率。

主权项

1.一种用于将基因修复寡核碱基(GRON)介导的突变引入细胞中的靶脱氧核糖核酸(DNA)序列中的方法，所述方法包括：将成簇的规律间隔的短回文重复复合物(CRISPR复合物)和GRON递送至所述细胞中，其中所述GRON包括以下特征中的一项或多项：所述GRON长度大于55个碱基，所述GRON任选地包含两个或更多个突变位点以用于引入至所述靶DNA中；所述GRON包含一个或多个无碱基核苷酸；所述GRON包含一个或多个8’氧代dA和/或8’氧代dG核苷酸；所述GRON包含在其3’端处的反向碱基；所述GRON包含在其5’或3’端处的一个或多个2’‑O‑甲基核苷酸；所述GRON包含在其5’端处的一个或多个2’‑O‑甲基RNA核苷酸；所述GRON包含在其5’端处的至少两个2’‑O‑甲基RNA核苷酸；所述GRON包含嵌入染料；所述GRON包含5’末端帽；所述GRON包含选自由以下组成的组的主链修饰：硫代磷酸酯修饰、膦酸甲酯修饰、锁核酸(LNA)修饰、O‑(2‑甲氧基乙基)(MOE)修饰、二PS修饰以及肽核酸(PNA)修饰；所述GRON包含一个或多个链内交联；所述GRON包含共价连接至其的一种或多种荧光染料；以及所述GRON包含增加杂交能量的一个或多个碱基。