[发明专利]使用拼装序列扩增片段化的目标核酸的方法

摘要

本发明提供扩增一含有短目标核酸片段的片段化的目标核酸的方法，使用一拼装序列将这些短片段转化为更长的序列，从而鉴定和检测这些序列。这对于试图在高度片段化的核酸样本中鉴定微小的遗传变异，诸如SNVs尤其重要。扩增伴随着所述短目标核酸序列与所述拼装序列的杂交，这些短序列作为延伸的引物。由于含有SNVs的所述片段的目标核酸作为在所述拼装序列上的引物使用，它们在扩增中被保存并且能被检测到。

主权项

一扩增含有短目标核酸片段的一片段化的目标核酸的方法，所述方法包括步骤：A.混合所述片段化的目标核酸和一拼装序列，其中所述拼装序列基本上与所述片段化的目标核酸互补；B.所述短目标核酸片段退火与所述拼装序列结合，通过聚合酶所述短目标核酸片段在3’端方向延伸以产生一群含有一群第一核酸和所述拼装序列的第一双重核酸；C.从所述一群第一核酸解离所述拼装序列；D.一引物退火与所述一群第一核酸结合，其中所述引物基本上与所述拼装序列相同，且位于相对于相结合的核酸片段的3’端方向的所关注的检测区域，用聚合酶在所述3’端方向延伸所述引物以产生一群含有一群第二核酸和所述一群第一核酸的第二双重核酸；E.分离所述的所述第一和所述第二核酸群；F.退火所述第一群和所述第二群核酸使其相互结合和与所述拼装序列结合，在3’端方向延伸所述一群第一核酸和所述一群第二核酸；且G.重复步骤E和F，从而扩增所述片段化的目标核酸。