[发明专利]具有通用元件的基于荧光团的寡核苷酸探针在审
| 申请号： | 201480045830.4 | 申请日： | 2014-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN105555969A | 公开（公告）日： | 2016-05-04 |
| 发明（设计）人： | D·弗伦奇;保罗·德贝纳姆;丽贝卡·霍华德;T·布朗;J·理查德森 | 申请（专利权）人： | LGC有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 隆天知识产权代理有限公司 72003 | 代理人： | 王芝艳;吴小瑛 |
| 地址： | 英国米德*** | 国省代码： | 英国;GB |
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| 摘要： | 本发明提供了一种使用包含两个独立的配偶体寡核苷酸组分的探针系统，来检测靶多核苷酸的存在和/或靶多核苷酸内部序列变异的存在的方法，其中第一寡核苷酸具有第一和第二区段，其中第一区段包含用至少一种目视可检测标记物标记并且不能够与靶多核苷酸的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；并且其中第二区段包含能够与靶多核苷酸的一部分序列杂交的核苷酸序列；并且第二寡核苷酸具有第一和第二区段，其中第一区段包含能够与第一寡核苷酸的第一区段的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；并且第二区段包含能够与靶多核苷酸的核苷酸序列杂交的核苷酸序列，所述靶多核苷酸的核苷酸序列毗邻于第一寡核苷酸的第二区段能够与之杂交的核苷酸序列。本发明还提供了额外寡核苷酸和探针的备选方法用于这类方法中。 | ||
| 搜索关键词： | 具有 通用 元件 基于 荧光 寡核苷酸 探针 | ||
【主权项】：
一种检测目的样品中靶多核苷酸的存在和/或靶多核苷酸内部序列变异的存在的方法，包括步骤：(i)提供包含两个独立的配偶体寡核苷酸组分的探针，所述两个独立的配偶体寡核苷酸组分包括：a)具有第一和第二区段的第一寡核苷酸，其中第一区段包含用至少一种目视可检测标记物标记并且不能够与所述靶多核苷酸的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；并且其中第二区段包含能够与所述靶多核苷酸的一部分序列杂交的核苷酸序列，第一寡核苷酸的所述第二区段具有在25℃和50℃之间的解链温度(Tm)；和b)具有第一和第二区段的第二寡核苷酸，其中第一区段包含能够与第一寡核苷酸的第一区段的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；并且第二区段包含能够与靶多核苷酸的核苷酸序列杂交的核苷酸序列，所述靶多核苷酸的核苷酸序列毗邻于第一寡核苷酸的第二区段能够与之杂交的核苷酸序列，所述第二寡核苷酸的第二区段具有在40℃和70℃之间的解链温度(Tm)；(ii)使目的样品暴露于(i)的探针，从而在靶多核苷酸存在下，三重杂交事件可以发生，所述三重杂交事件包括(a)第一寡核苷酸的第一区段与第二寡核苷酸的第一区段杂交；和(b)第一寡核苷酸的第二区段和第二寡核苷酸的第二区段均与靶多核苷酸杂交；(iii)检测目视可检测标记物的变化，其中目视可检测标记物的变化表示存在靶多核苷酸和/或靶多核苷酸内部的序列变异；并且(iv)使用解链曲线分析或复性曲线分析，分析目视可检测标记物的变化。
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