[发明专利]核酸酶概况分析系统

摘要

本公开的一些方面提供了用于确定核酸酶靶位点偏好性和位点特异性内切核酸酶的特异性的策略、方法和试剂。本文中提供的一些方法利用了新的“单切割”策略来筛选包含候选核酸酶靶位点和恒定插入区的重复单元的多联体文库，经由对临近和等同于切割靶位点的完整靶位点测序，从而鉴定出可由感兴趣的核酸酶切割的文库成员。本公开的一些方面提供了基于测定位点特异性内切核酸酶的靶位点偏好性和特异性，用于选择位点特异性内切核酸酶的策略、方法和试剂。还提供了用于测定靶位点偏好性和特异性的方法和试剂。

主权项

一种用于鉴定核酸酶的靶位点的方法，该方法包括：(a)提供切割双链核酸靶位点的核酸酶，其中对所述靶位点的切割产生包含5′磷酸模块的经切割的核酸链；(b)使(a)的核酸酶与候选核酸分子的文库在适合所述核酸酶切割包含所述核酸酶的靶位点的候选核酸分子的条件下接触，其中每个核酸分子包含序列的多联体，所述序列包含候选的核酸酶靶位点和恒定的插入序列；和(c)鉴定在(b)中被所述核酸酶切割的核酸酶靶位点，其通过测定在步骤(b)中被所述核酸酶切割的核酸链上的未切割的核酸酶靶位点的序列进行。