[发明专利]用于对酮修饰的多肽类进行肟缀合的方法

摘要

本发明提供由酮修饰的蛋白质制备蛋白质缀合物的方法。在一个实施方案中，通过经与1,3‑二卤代丙酮或类似含酮的反应剂反应连接两个游离半胱氨酸、而将两个半胱氨酸的硫原子连接在一起来制备该蛋白质。然后将硫原子之间插入的酮用于形成肟，由此将所述蛋白质缀合于有效负荷。在另一个实施方案中，通过与1,3‑二卤代丙酮或类似反应剂反应来将两个半胱氨酸联结在一起，并且新的酮用于与适合的有效负荷分子形成肟。该方法为肟形成提供了改进的反应条件，由此得到高收率和改善的产物均匀性。

主权项

1.将酮修饰的多肽转化成肟修饰的多肽的方法，其中该方法包括：通过形成包含可还原二硫键的多肽、含水缓冲液和1,3‑二卤代丙酮的混合物、然后添加能够还原所述二硫键的还原剂，来将包含可还原二硫键的多肽转化成酮修饰的多肽，其中酮修饰的多肽包含式[PP]–S‑CH₂‑C(＝O)‑CH₂‑S‑[PP]的连接基团，其中每个S是来自二硫键的硫，且[PP]表示在此该连接基团的末端连接至所述多肽，以及，使酮修饰的多肽在胺促进剂的存在下和至少1mg/mL的多肽浓度下接触式R‑O‑NH₂的基团，其中式R‑O‑NH₂的基团是式H₂N‑O‑L‑PL的化合物，其中L表示连接基，且PL表示有效负荷基团。