[发明专利]用于从混合物富集突变核酸的方法

摘要

由于非常过量的野生型DNA的同时存在，从生物样品检测罕见体细胞突变的存在经常是挑战性的。本发明描述了通过排除可扩增的野生型DNA而允许富集突变型DNA的方法。

主权项

1.寡核苷酸和错配嵌入化合物在制备用于从样品富集核酸混合物中的目标核酸的变体的方法的试剂盒中的用途，所述目标核酸以两种变体序列的形式存在，其中所述变体在单个核苷酸位置处不同，所述方法包括：提供包括所述目标核酸的样品，其中待富集的变体在大量过量的另一种变体中以低丰度存在于所述样品中；以超过所述目标核酸的摩尔的浓度提供与所述目标核酸的一条链互补的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸与亲和标记附接，并且所述寡核苷酸在所述单个核苷酸位置处与待富集的变体完全匹配而在所述单个核苷酸位置处与所述另一种变体具有错配；提供适合于所述寡核苷酸与所述目标核酸杂交的条件，以生成由所述寡核苷酸和所述目标核酸的一种变体的一条链组成的双链体多核苷酸；使所述双链体多核苷酸与优先仅结合至含有错配的双链体多核苷酸的错配嵌入化合物接触，其中所述化合物进一步能够用光催化在所述错配位点处切割所述双链体多核苷酸的一条链；使所述双链体多核苷酸经受光照，导致产生切割和未切割的双链体多核苷酸两者；将切割和未切割的双链体多核苷酸两者应用于亲和基质，所述亲和基质识别并结合至所述寡核苷酸上的亲和标记；提供仅切割的双链体多核苷酸变性的条件并从所述亲和基质移除变性的单链；且在使未切割的多核苷酸双链体变性的条件下提供缓冲液；并收集含有富集的目标核酸的变体的一条链的缓冲液，其中所述错配嵌入化合物是Rh(bpy)2(chrysi)3+、Rh(bpy)2(phzi)3+或它们的具有下式结构的类似物：，其中N表示氮，Rh表示铑，且R1、R2和R3独立地选自氢、烷基、芳基、固体支持物和附接亲和标记的接头。