[发明专利]一种培育雄性不育库蚊的方法

摘要

通过敲除其转化体‑2基因可以培育都是雄性的库蚊种群，造成X染色体精子功能障碍，从而产生严重的雄性后代偏向。不同于以往的方法，我们最近发现Tra 2敲除还导致雌性特异性合子死亡(XX)。这种技术也因此被用于杀死可能在以前的敲除过程中存活下来的早期雌性合子(XX)，只有当向食品和饮料中添加一种抗菌物质时才能产生都是雄性的后代。抗生素曝光时间的严格限制允许蚊子适应沃尔巴克氏体细菌以生存下来。所选的沃尔巴克氏体细菌可能诱发胞质不相容性(CI)达到100％。因此在自然的环境中，所有转基因后代都是雄性，与被另一个沃尔巴克氏体品系感染的雌性(双向CI)异交或未感染雌性(单向CI)杂交时导致不育。

主权项

一种培育全雄性不育库蚊的方法，其中包括：i)培育库蚊生物品系，所述库蚊品系携带一个或多个插入的Tet‑on+转化子‑2遗传敲除系统，以沉默内源性Tra‑2基因，其中所述敲除效应仅发生在所述饲养条件下(实验室或饲养)，所述敲除系统只能通过添加所述物质激活，所述Tra‑2敲除系统可以在雄性精子形成期间表达，并杀死带有X(m)染色体的精子，当X(m)染色体的精子存活时表达可杀死早期雌性受精卵，所有类型的敲除效应将产生严重的雄性偏向，雄性后代可达100％；ii)在缺乏所述物质的情况下形成所述育种品系，因此在自然环境中的物种沉默，该物质在自然栖息地不存在，只能通过喂养提供给转化昆虫从而诱导敲除系统；iii)所述昆虫品系还携带一个或多个内共生沃尔巴克氏体，其中雌性感染昆虫与Tet‑on+Tra 2 RNAi品系雄性杂交，或通过胚胎细胞质感染昆虫，向目标物种的成年雌性的胸肌中进行微量注射，以生成人工细菌感染蚊子(所述沃尔巴克氏体不同于那些天然种群中可能已经存在的沃尔巴克氏体，如果雄性与自然种群选育的雌性昆虫杂交，可诱导胞质不相容性(Ci))，其中所述添加剂抗生素物质在Tra 2 RNAi的生命周期中的短暂存在，以允许沃尔巴克氏体可安全地保留在昆虫的品系内；iv)将所述品系的雄性Tet‑on+Tra 2 RNAi/沃尔巴克氏体后代释放至自然种群中，不需要性别鉴定步骤以清除雌性，可以通过喂养野生雌性实现种群控制，通过CI对其进行部分或全部绝育。