[发明专利]一种L‑苯丙氨酸糖酸转化率提高的谷氨酸棒杆菌重组菌

摘要

本发明公开了一种L‑苯丙氨酸糖酸转化率提高的谷氨酸棒杆菌重组菌，属于代谢工程领域。本发明的重组菌株缺失了基因aroP、aceE、ldh、pstI，在原pstI位点整合了iolT2‑ppgk基因，同时转入了含有L‑Phe合成途径八个关键酶的调控表达质粒。本发明的重组菌株明显提高了L‑Phe中间产物PEP积累量，L‑Phe产量以及L‑Phe对葡萄糖的糖酸转化率，改变碳源流向降低或者阻断副产物积累，此代谢工程的手段能被应用于以PEP为前体的其他代谢产物的合成。

主权项

一种谷氨酸棒杆菌重组菌，其特征在于，以谷氨酸棒状杆菌为出发菌株，缺失了L‑Phe吸收途径的基因aroP、乙酸脱氢酶系I基因aceE、乳酸脱氢酶基因ldh、葡萄糖转运PTS系统的基因pstI，在原pstI位点整合了非依赖于PEP消耗的葡萄糖转运基因iolT2‑ppgK，同时转入了含有L‑Phe合成途径八个关键酶的调控表达质粒；所述基因pstI、iolT2‑ppgK、aroP、aceE、ldh的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20所示；所述的八个关键酶为编码3‑脱氧‑D阿拉伯庚酮糖‑7磷酸合酶的aroFfbr、编码莽草酸脱氢酶的aroE，编码磷酸烯醇式丙酮酸合成酶的ppsA、编码转酮酶的tktA、编码分支酸变位酶/预苯酸脱水酶双功能酶的pheAfbr、编码5‑烯醇丙酮酸莽草酸‑3‑磷酸合酶的aroA、编码氨基转移酶的tyrB和编码莽草酸激酶的aroL；所述八个关键酶的核苷酸序列分别是：SEQ ID NO.17、Gene ID:3343183、Gene ID:14791674、Gene ID:3343601、SEQ ID NO.18、Gene ID:3345010、Gene ID:12933673、Gene ID:12930837所示的序列。