[发明专利]一种螺旋藻基因转化筛选的方法在审
| 申请号： | 201510003572.X | 申请日： | 2015-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN104450766A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 章军;徐虹;丁旭东;杜正伟;郑天凌 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12R1/01 |
| 代理公司： | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 马应森 |
| 地址： | 361005 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 一种螺旋藻基因转化筛选的方法，涉及一种基因工程。1)构建获得包含有两个插入序列、gfp基因、nptII标记基因和Ap标记基因的螺旋藻整合筛选质粒pEGFP-IS-IS-Km；2)供体质粒pEGFP-IS-IS-Km的超声转化和筛选：用EcoRⅠ酶切pEGFP-IS-IS-Km，获得线状质粒，两端各有一个IS序列，与转座子特征结构类似，用实验室超声转化法转化螺旋藻869s，以苄青霉素和G418(nptII)筛选出插入突变的螺旋藻株，两步筛选法筛选突变株，抗性平板初筛，梯度稀释后利用荧光显微镜挑出单根绿色荧光藻，然后超声波复筛，进行扩大培养，筛选出优良性状藻株。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 螺旋藻 基因 转化 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种螺旋藻基因转化筛选的方法，其特征在于包括以下步骤：1)构建获得包含有两个插入序列、gfp基因、nptII标记基因和Ap标记基因的螺旋藻整合筛选质粒pEGFP‑IS‑IS‑Km；2)供体质粒pEGFP‑IS‑IS‑Km的超声转化和筛选：用EcoRⅠ酶切pEGFP‑IS‑IS‑Km，获得线状质粒，两端各有一个IS序列，与转座子特征结构类似，用实验室超声转化法转化螺旋藻869s，以苄青霉素和G418(nptII)筛选出插入突变的螺旋藻株，两步筛选法筛选突变株，抗性平板初筛，梯度稀释后利用荧光显微镜挑出单根绿色荧光藻，然后超声波复筛，进行扩大培养，筛选出优良性状藻株。
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