[发明专利]高纯度河豚毒素的提取方法

摘要

本发明公开了一种不含去水河豚毒素的高纯度河豚毒素的提取方法，先用醇醚扩散法纯化TTX，再用高压液相色谱进一步分离Anh-TTX，使TTX的纯度达98%以上，且不含Anh-TTX，生物体内和TTX共存的Anh-TTX含量极微，由于其分子结构、分子量及理化性质和TTX非常接近，分离难度大，选用醇醚扩散法纯化TTX，不仅可以提高TTX纯度，同时可使Anh-TTX等（TTX衍生物）经离心分离，本发明利用PHLC-离子交换、凝胶工艺，使沉淀物中的Anh-TTX与TTX得到彻底分离，是Anh-TTX分离一大突破。

主权项

  高纯度河豚毒素的方法，其特征在于：1）醇醚扩散法纯化TTX：先将粗品河豚毒素加4‑22%醋酸溶解，加无水乙醇1‑12倍，离心除去不溶物，然后将上清液移到小烧杯，贮藏在密闭的容器中，并另放一杯乙醚，控制温度3‑35℃、10‑48小时，最后将醇醚溶液经离心分离出沉淀物；2）高压液相色谱进一步分离去水河豚毒素：将上述沉淀物，用1‑32%磷酸溶液，用流动相组成含有0.1‑12%甲醇的0.01‑.0.25M磷酸盐缓冲液，调PH为5.7，流动相流速1‑20ml/min,用示差检测器进行检测，分离过程按记录仪上出峰图，分离去水河豚毒素馏份；3）河豚毒素的脱盐、回收：选择填料为酸性阳离子交换树脂和生物凝胶，洗脱剂用1‑22%的醋酸，收集PH4‑7馏份，加氨水调节PH7.5‑10,可沉淀出河豚毒素，经反复分离提取和脱盐，可得到纯品河豚毒素结晶。