[发明专利]一种基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法

摘要

本发明公开了一种基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，面粉中过氧化苯甲酰(BPO)，BPO具有氧化性，对一般物质均产生荧光猝灭，一般不能用荧光方法进行直接测定。本发明利用BPO具有氧化性这一性质，将Fe(Ⅱ)氧化为Fe(Ⅲ)，Fe(Ⅲ)能够猝灭盐酸左氧氟沙星的荧光，据此建立BPO的浓度随盐酸左氧氟沙星的荧光强度变化关系，做出标准曲线，对小麦面粉进行样品测定。本发明的方法具有简便、快捷、检出限低、准确性好等特点。

主权项

一种基于荧光猝灭法检测小麦粉中过氧化苯甲酰的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、配制过氧化苯甲酰储备液准确称取过氧化苯甲酰于容量瓶中，加入无水乙醇溶解，用无水乙醇定容至刻度线处，摇匀，配制成浓度为0.1g/L的过氧化苯甲酰储备液，置于4℃冰箱中，备用；步骤二、配制待测样品溶液准确称取待测面粉，置于盛有无水乙醇的锥形瓶中，面粉与无水乙醇的质量比为1:10，密封锥形瓶，在恒温磁力搅拌器上搅拌1小时，使待测面粉中的过氧化苯甲酰充分溶解，将混合液转移至离心管中，1500转/分钟，吸出上清液置于容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线处，配制成待测样品溶液，放入4℃冰箱中，待检；步骤三、制备Fe(Ⅱ)溶液精确同时精密称取硫酸亚铁铵，用蒸馏水溶解并定容到至刻度线处，摇匀，配成浓度为0.6g/L的储备液，置于4℃冰箱中，备用；步骤四、制备盐酸左氧氟沙星溶液精密称取盐酸左氧氟沙星对照品，用蒸馏水溶解并定容到至刻度线处，摇匀，配成浓度为0.4g/L的储备液，置于4℃冰箱中，备用；步骤五、样品测定配制标准溶液：准确移取质量浓度为0.1g/L的过氧化苯甲酰储备液1、2、4、6、8、10、20、40、60、80、100ml，分别置于11个100ml容量瓶中，用乙醇定容至刻度线处，摇匀，分别配制成质量浓度为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1g/L的过氧化苯甲酰乙醇标准溶液；制作标准曲线：准确移取0.6g/L的硫酸亚铁铵2.0ml共12份，其中1份加入1.0ml乙醇，其余11份加入质量浓度为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1g/L的过氧化苯甲酰乙醇标准溶液1.0ml，静置30min，再向12份中均加入质量浓度为0.4g/L的盐酸左氧氟沙星溶液2.0ml，此时过氧化苯甲酰的浓度为0.0002、0.0004、0.0008、0.0012、0.0016、0.005、0.004、0.008、0.012、0.016、0.02g/L，硫酸亚铁铵溶液的浓度为0.24g/L，盐酸左氧氟沙星的浓度为0.16g/L；步骤六、将上述12份溶液混合均匀，室温静置15min，用F‑2500型荧光光谱仪测定标准溶液的荧光强度，荧光光谱仪的激发波长λex＝410nm、发射波长λem＝500nm、激发波长和发射波长狭缝宽度均为5nm、负高压为400V，以过氧化苯甲酰乙醇溶液的质量浓度为横坐标，F0/F为纵坐标，由Origin软件绘制曲线，并得出标准曲线的线性回归方程：ln(F0/F)＝0.2669C式中F0为空白溶液中盐酸左氧氟沙星的荧光强度，F为不同浓度的过氧化苯甲酰乙醇溶液中，盐酸左氧氟沙星的荧光强度，单位为g/L，线性相关系数为0.9876；检测面粉中过氧化苯甲酰含量：取待测样品溶液1.0ml，加入0.6g/L的硫酸亚铁铵2ml，静置30min后加入0.4g/L盐酸左氧氟沙星溶液2ml，静置15min，用荧光光谱仪检测样品溶液的荧光强度，由线性回归方程计算出待测面粉中过氧化苯甲酰的浓度。