[发明专利]一种核内稳定表达人巨细胞病毒pp65蛋白K562细胞株的制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201510016175.6 | 申请日： | 2015-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN104630273A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 王明丽;甘霖;刘峰 | 申请（专利权）人： | 王明丽;安徽博睿生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/38;C12N5/10;G01N33/569 |
| 代理公司： | 安徽合肥华信知识产权代理有限公司 34112 | 代理人： | 余成俊 |
| 地址： | 230032 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新的建立细胞核内稳定表达人巨细胞病毒（HCMV）pp65蛋白细胞株的建立方法及应用。在HCMV pp65基因的3’端增加了核定位信号（pp65-NLS），使得转染该基因的细胞核内表达pp65基因，与HCMV感染宿主细胞时的细胞定位一样。再通过慢病毒介导pp65-NLS整合到K562细胞中，建立稳定表达pp65-NLS的K562细胞株。该细胞株可作为HCMV pp65抗原血症检测试剂盒的阳性对照品，从而实现该试剂盒在临床诊断上的可靠应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 稳定 表达 巨细 病毒 pp65 蛋白 k562 细胞株 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种核内稳定表达人巨细胞病毒pp65蛋白K562细胞株的制备方法:包括以下步骤：采用套叠PCR获取3‑’端增加核定位信号的人巨细胞病毒pp65基因；将该基因克隆至慢病毒表达载体PLVX‑puro中，并包装表达pp65‑NLS基因的慢病毒；用表达pp65‑NLS基因的慢病毒感染K562细胞；采用嘌呤霉素筛选出稳定表达pp65‑NLS基因的K562细胞株。
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