[发明专利]一种大鼠肝细胞分离方法在审
| 申请号： | 201510016868.5 | 申请日： | 2015-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN104630130A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 邢雪琨;陈红丽;樊晋宇;武红艳;郏亚静 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 李晓林;陈娟 |
| 地址： | 450003 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提供一种大鼠肝细胞分离方法，包括步骤：（a）取出大鼠肝脏；（b）预热35~38℃的无钙灌流液灌流，直到肝脏胀大；（c）剪断肝下下腔静脉，使血液流出，直到肝脏成土黄色；（d）预热的35~38℃含钙灌流液灌流3~7min；（e）预热35~38℃的含0.05%Ⅳ型胶原酶的灌流液灌流1~3min。本发明提供的大鼠肝细胞分离方法，操作简单、胶原酶使用量少、细胞产量及成活率高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大鼠 肝细胞 分离 方法 | ||
【主权项】：
一种大鼠肝细胞分离方法，其特征在于，包括步骤：（a）取出大鼠肝脏；（b）预热35~38℃的无钙灌流液灌流，直到肝脏胀大；（c）剪断肝下下腔静脉，使血液流出，直到肝脏成土黄色；（d）预热的35~38℃含钙灌流液灌流3~7min；（e）预热35~38℃的含0.05%Ⅳ型胶原酶的灌流液灌流1~3min；（f）止血钳夹住肝下下腔静脉，0.05%Ⅳ型胶原酶继续灌流，待肝脏胀大时停止灌流，原位消化4~6min，原位消化期间不间断使用35~38℃生理盐水淋在肝脏上；（g）去除止血钳，预热35~38℃的含0.05 %Ⅳ型胶原酶的灌流液灌流2~3min；继续执行步骤（f）和步骤（g），当肝脏表面出现裂纹时，执行步骤（h）；（h）分离肝脏，撕开肝包膜，将肝细胞收集到3~5℃含钙灌流液中，过滤，收集滤液；（i）将收集的滤液3~5℃低速离心，弃上清，加含钙灌流液，重悬，重复2~4次；（j）将离心收集的细胞在细胞培养皿中培养，每4h，换液。
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