[发明专利]一种变温转染技术

摘要

一种变温转染技术，包括如下步骤：利用培养液培养细胞；收集目的细胞；细胞与DNA物质混匀后进行变温；传代培养。本发明的基本原理和有益效果是，利用细胞在冻存和复苏过程中细胞膜松散，容易吸收外源物质的原理，通过将细胞进行物理变温，在变温过程中产生细胞膜的间隙，使外源物质进入细胞，从而达到转染的目的，所述技术用料简单，操作简单，成本低廉，无需专业设备即能做到DNA物质的转移，转染效果好，无需转染后换液且无大量特殊外源化合物对细胞的影响。

主权项

一种变温转染技术，其特征在于所述技术包括如下步骤：1)利用培养液培养细胞；2)收集目的细胞：2.1)吸掉所述步骤1)中培养液的上清；2.2)用3ml PBS清洗两次；2.3)加入0.25％胰酶，使大部分细胞脱落悬浮起来；2.4)加入含血清的培养液，中和胰酶，终止消化，得到细胞悬液；2.5)对步骤2.4)中所述细胞悬液在常温下，以1000rpm速度离心处理；2.6)去除离心后得到的细胞悬液上清，得到目的细胞；3)细胞与DNA物质混匀后进行变温：3.1)利用20μl DMSO、180ul新鲜培养液配制得到冻存液；3.2)在所述目的细胞中加入500μl新鲜培养液，再加入所述冻存液，混匀；3.3)在‑80℃条件下，冻存一夜；3.4)在37℃条件下，解冻；3.5)无菌条件下，在解冻后得到的液体中，加入新鲜培养液；3.6)对将步骤3.5)中得到的液体在常温下，以1000rpm速度离心处理；3.7)利用20ng质粒和1ml培养液配制转染液；3.8)去掉步骤3.6)中上清，并加入步骤3.7)中所述转染液，混匀；4)培养：每3天进行一次传代培养。