[发明专利]一种从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法

摘要

一种从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法，属于生物化工技术领域。所述方法是以牛乳清为原料液，以具有多级次孔隙的阳离子交换嵌合型复合晶胶为分离介质，通过晶胶层析，经床柱平衡、上样吸附、缓冲溶液冲洗、含盐洗脱液分步洗脱、后续脱盐和冷冻干燥等常规处理，分离获得纯度达98%的高纯度乳过氧化物酶，收率可达92%。所述阳离子交换嵌合型复合晶胶介质对乳清中常规层析难以分开的乳铁蛋白和乳过氧化物酶有很好的选择性。所述方法步骤少，操作简单，分离迅速，成本低，所得乳过氧化物酶纯度和收率高，在乳清高值化利用及活性蛋白质的分离方面具有广阔的应用前景。

主权项

一种从牛乳清中分离乳过氧化物酶的方法，其特征在于取直径10mm、高38mm、内嵌纤维素晶胶微球、带磺酸基功能基团的聚甲基丙烯酸羟乙酯阳离子交换嵌合型晶胶介质床柱，纤维素晶胶微球的平均粒径为900μm，占晶胶基质骨架的质量比为25%，晶胶介质床柱的有效孔隙率为83%，最大孔隙率为94%，孔径为0.1～300μm，对溶菌酶模型蛋白的饱和吸附容量5 mg/mL，以10mM、pH为6 的Na2HPO4/NaH2PO4溶液为缓冲溶液，用45 mL缓冲溶液对该阳离子交换嵌合型晶胶床柱进行平衡；取4 mL 乳清，用缓冲溶液稀释4倍，以0.5 cm/min流速上样，然后用缓冲溶液冲洗除去未吸附的杂质，分别用0.05、0.5、2 M的NaCl洗脱液进行分步洗脱，收集目标洗脱峰，经脱盐和冷冻干燥，得到乳过氧化物酶。