[发明专利]一种酶法高效合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺

摘要

本发明公开了一种酶法高效率合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺，具体为耐有机溶剂蛋白酶WQ9‑2或其突变体催化苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯或其盐酸盐酶法合成苄氧羰基阿斯巴甜。本发明采用来自于Bacillus cereus耐有机溶剂蛋白酶WQ9‑2或其突变体催化合成阿斯巴甜前体（Cbz‑APM）的反应分离耦合工艺，能够很好地解决底物抑制性，底物的利用率及产物的后期分离等问题。

主权项

1.一种酶法高效率合成苄氧羰基阿斯巴甜的工艺，其特征在于：耐有机溶剂蛋白酶WQ9‑2或其突变体催化苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯或其盐酸盐酶法合成苄氧羰基阿斯巴甜；所述耐有机溶剂蛋白酶WQ9‑2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述酶法合成的反应体系中pH值为6；所述苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯或其盐酸盐的反应体系摩尔比为1:3～1:6；所述耐有机溶剂蛋白酶WQ9‑2或其突变体的用量为1000‑2000U/mL；所述酶法合成在有机溶剂和/或水相中进行，所述有机溶剂选自DMSO、乙醇或者甲醇中的一种；当酶法合成在有机溶剂和水相的混合液中进行时，有机溶剂在混合液中的体积浓度(v/v)不大于10％；所述突变体为突变体WQ9‑2‑3C、WQ9‑2‑4F、WQ9‑2‑7K、WQ9‑2‑13D、WQ9‑2‑20C；其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7所示。