[发明专利]大熊猫尿液促黄体素的酶联检测方法及其应用

摘要

本发明公开了大熊猫尿液促黄体素(LH)酶联免疫方法的建立与应用，属于ELISA检测方法领域。为解决目前缺乏大熊猫尿液促黄体素(LH)的检测方法，对大熊猫繁育缺乏科学指导等问题，本发明以制备得到两种抗大熊猫LH抗体，对两种抗体进行配对组合和筛选，包被抗体和酶标抗体，以合成的LH特异肽段作为标准品，开发了大熊猫尿液促黄体素(LH)检测方法。此方法通过对大熊猫发情期尿液促黄体素的测定，可对大熊猫发情、排卵进行监测，为大熊猫的人工授精或自然交配提供时间指导。

主权项

一种大熊猫尿液促黄体素的酶联检测方法，包括酶联检测方法中涉及的抗大熊猫促黄体素抗体的制备方法，其特征在于，包括以下内容：（1）特异多肽片段的设计与合成：分别设计并合成大熊猫LHβ亚基的两条特异多肽片段，记为LHβ‑1和LHβ‑2；所述LHβ‑1的编码序列是序列表中的SEQ ID No.1，所述LHβ‑2的编码序列是序列表中的SEQ ID No.2；将所述的LHβ‑1和LHβ‑2两条多肽片段分别与匙孔血蓝蛋白偶联，得到两种偶联免疫原，分别记为LHβ‑KLH‑1和LHβ‑KLH‑2；（2）抗大熊猫促黄体素抗体的制备：将步骤（1）中所述的偶联免疫原LHβ‑KLH‑1免疫兔，对免疫后的兔进行心脏采血，并分离血得到血清，将得到的血清通过亲和层析，分步收集高浓度的纯化产物，然后通过超滤离心管进行浓缩，即得浓缩后第一种抗大熊猫促黄体素抗体；同时，将步骤（1）中所述的偶联免疫原LHβ‑KLH‑2免疫兔，并进行上述相同的操作后，得到浓缩后第二种抗大熊猫促黄体素抗体。