[发明专利]一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法

摘要

本发明公开了一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，属于生物医学技术领域。本发明方法先制备疏水基片和载细胞的微尺度水凝胶模板，通过倒模的方式制备水凝胶微孔板，在培养箱中进行细胞培养原位形成细胞球。本发明中使用载细胞的微尺度水凝胶作为构建带有球面微孔的水凝胶微孔板，无需后续人为进行细胞接种，孔内细胞密度可控，易于构建大小可控、形状规则的细胞球。本方法成本低、操作简单、可重复性好、适用范围广，在组织工程和再生医学以及药物筛选等领域中具有广阔的应用前景。

主权项

一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将基片进行疏水处理，制得疏水基片；2)将培养的细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度3％～5％的明胶或甲基丙烯酸酰化明胶；3)将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.05～2μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在0～20℃下静置至半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后通过低温处理或紫外照射使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度1％～5％的琼脂糖，或者为质量浓度5％～20％的聚乙二醇水凝胶及聚乙二醇水凝胶衍生物；5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，直至第一水凝胶融化为溶胶，在此培养过程中，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。