[发明专利]一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料及其制备方法

摘要

本发明涉及一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料及其制备方法，所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料以壳聚糖为载体，叶酸和生物素为配体，利用N‑酰化反应制备叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料。本发明通过先后加入活性生物素酯和活性叶酸酯与壳聚糖反应一次合成双配体修饰的壳聚糖材料，接枝率高，反应时间较两步法大大缩短，所制备的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料可用作一种靶向抗癌药物载体材料。

主权项

一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于，所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料以壳聚糖为载体，叶酸和生物素为配体，利用N‑酰化反应制备叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料；其制备方法步骤如下：1)制备壳聚糖溶液：将壳聚糖溶于醋酸溶液中，得到浓度为5‑10mg/mL的壳聚糖溶液，并调节pH值至4.7‑6.0，备用；2)制备琥珀酰亚胺基生物素酯：将DCC、NHS与生物素按摩尔比1.2‑1.5:1:1混合后于50‑60℃条件下反应16‑24h，过滤后在冰浴条件下向滤液中滴加乙醚析出沉淀，然后用异丙醇对沉淀进行重结晶，过滤收集结晶并用DMF溶解结晶，过滤后逐滴加入无水乙醚中，冷藏过夜，移走上清液，室温下真空干燥得到琥珀酰亚胺基生物素酯，备用；3)制备具有氨基反应活性的叶酸活性酯溶液：将叶酸溶于无水DMSO中，并加入EDC.HCl，在避光条件下于25‑40℃磁力搅拌反应1‑4h，得到叶酸活性酯溶液，浓度以叶酸质量浓度计为26‑44mg/mL，备用；4)将步骤2)所得琥珀酰亚胺基生物素酯溶于DMF中，得到浓度为20‑34mg/mL的生物素酯溶液，在磁力搅拌条件下，将生物素酯溶液缓慢加入步骤1)所得壳聚糖溶液中，在室温条件下反应至反应液澄清，然后在搅拌条件下缓慢加入步骤3)所得叶酸活性酯溶液，在室温下继续反应12‑24h，反应结束后将反应液移入透析袋，于蒸馏水中透析3d，每6h换水一次，透析后经冷冻干燥即得到叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料。