[发明专利]用萃取反萃分离纯化楸树内生真菌发酵液中楸灵素的方法

摘要

本发明公开一种用萃取反萃分离纯化楸树内生真菌发酵液中楸灵素的方法：调整楸树内生真菌发酵液pH为4～6；用稀酸溶液预饱和处理乙酸乙酯，使得乙酸乙酯的pH和所述发酵液匹配；将调整好pH的楸树内生真菌发酵液与乙酸乙酯混匀，静置进行双液相萃取，收集乙酸乙酯相；将所述收集到的乙酸乙酯相和pH为7～11水相混匀，进行反萃取，回收水相即为纯化的楸灵素水溶液。与现有技术相比，本发明利用楸灵素的弱酸性，在保证80％以上的楸灵素收率的条件下，经过一次简单的萃取反萃过程，分离除去发酵液中的亲水杂质和疏水杂质，将楸灵素的纯度提高10倍以上，分离过程中乙酸乙酯可以悬蒸回收后重复利用，分离成本低，环境压力小。

主权项

一种从楸树内生真菌发酵液中分离纯化楸灵素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一、调整楸树内生真菌发酵液pH为4～6；步骤二、用稀酸溶液预饱和处理乙酸乙酯，使得乙酸乙酯的pH和所述发酵液匹配；步骤三、将所述步骤一所述楸树内生真菌发酵液与经步骤二所得乙酸乙酯混匀，静置进行双液相萃取，收集乙酸乙酯相；步骤四、将所述收集到的乙酸乙酯相和pH为7～11水相混匀，进行反萃取，回收水相即为纯化的楸灵素水溶液；步骤一中，所述楸树内生真菌发酵液通过如下方法制备得到：将长枝木霉CCTCC M208102接种到PDA培养基上，将长有菌丝的PDA培养基切下一块，放于CMX培养基上，室温下培养，1到3天后有孢子长出；挑取孢子转接到装有PDA液体培养基中，26～28℃，180rpm摇床震荡培养，1～8天后终止发酵，即得。