[发明专利]一种作物脂肪氧化酶同工酶LOX-1比活力的定量测定方法

摘要

本发明提供了一种作物脂肪氧化酶同工酶LOX-1比活力的定量测定方法。首先将作物磨碎加入提取液中磨成浆料，离心分离，得到酶液，将酶液放入比色皿中，分别测定反应前后在660nm处的吸光值，根据公式测定酶液蛋白浓度，最后按照酶比活力测定公式计算出酶比活力，本发明方法能快速、准确、定量地检测出脂肪氧化酶LOX-1比活力，其过程简单，成本低，其精确度明显优于已有的相关检测技术。

主权项

一种作物脂肪氧化酶同工酶LOX‑1比活力的定量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：  （1）将作物胚胎磨碎，加入提取液，研磨成匀浆,将匀浆装入超声波萃取釜中，将超声波发射频率设定在30‑40KHz，温度调节控制在20‑25℃，萃取时间5‑8分钟，然后转至具盖离心管，再用提取液洗涤3‑4次，洗涤液转至具盖离心管，脱色摇床振荡8‑10min，8000 rpm离心8‑10min，静置3‑5 min，取上层清液，即为酶液；  （2）取提取的酶液于比色皿中，加入适量的反应液，在660nm处测定吸光值，反应开始时记录吸光值，取出反应体系，至离心管，室温25℃避光反应，测定60min后的吸光值并记录，以吸光值的变化表示LOX‑1活力，用纯水作为参比调零，以缓冲液代替酶液作为对照；（3）测定酶液蛋白浓度：取适量酶液，先测定样品280nm OD 值和260nm OD 值，再按照以下公式计算酶液蛋白浓度：酶液蛋白浓度（mg/mL）=280nm OD 值*1.45‑0.74*260nm OD 值； （4）计算酶比活力：按照酶比活力测定公式计算出酶比活力，酶比活力=（样品0min的OD值‑样品60min的OD值）‑（对照0min的OD值‑对照60min的OD值）/酶液蛋白浓度。