[发明专利]高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺

摘要

本发明提供了高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺，该工艺设置以下3个变量：电场强度、脉冲数和酶解时间；利用design expert软件根据Box-Behnken设计方法对提取工艺优化，得到最佳优化提取工艺条件为电场强度30.96kv/cm，脉冲数9.22个，酶解时间1.67h，在此条件下河蚌多糖得率的预测值为6.08％。本发明的目的旨在提供一种以河蚌内脏组织为原料，利用高压脉冲电场新技术与木瓜蛋白酶解结合高效提取河蚌多糖的方法。该提取方法工艺简单、提取率高、条件温和、杂质少、成本低，且野生河蚌资源丰富，价格仅为打捞成本0.5元/斤，以废弃物扔掉的内脏组织为原料制取的河蚌多糖附加值高，可应用于食品、保健品、美容、医药和临床治疗等领域，具有广阔的应用前景。

主权项

一种高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺，其特征在于：以河蚌内脏组织为原料，利用高压脉冲电场新技术辅助酶解提取河蚌多糖并借助响应面优化提取工艺的新方法，其工艺流程和操作步骤如下：高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖工艺流程：原料及处理→打浆→匀浆→高压脉冲电场处理→酶解提取→分离→浓缩→醇沉→Sevag法脱蛋白→二次浓缩→二次醇沉→干燥→河蚌多糖；高压脉冲电场辅助酶解提取河蚌多糖操作步骤与要点如下：(1)原料及处理：将鲜活河蚌用水清洗干净，沥干后用刀将其剖开，取其全部内脏组织冷冻备用；(2)打浆：将冷冻河蚌内脏组织从冰柜中取出，室温下自然解冻，用打浆机打浆备用；(3)匀浆：将打浆后的浆液用胶体磨匀浆，得到均匀的浆液；(4)高压脉冲电场处理：按料液比6g/mL将河蚌匀浆液与水混合均匀，经高压脉冲电场处理，电场强度25～35kv/cm，脉冲数6～10个；(5)酶解提取：将经高压脉冲电场处理后的浆液调pH为7.5，加入质量分数为0.4％、比活力为8×105U/g的木瓜蛋白酶，搅拌后置于恒温水浴振荡器中，恒温水解作用温度55℃、酶解时间1～2h，然后于90℃水浴中灭酶10min；(6)分离：将灭酶后的河蚌酶解液冷却后离心(4000r/min、10min)取上清液，得到河蚌多糖母液；(7)浓缩：将得到的河蚌多糖母液置于旋转蒸发器中，在50℃条件下减压浓缩至原体积的1/10左右；(8)醇沉：向浓缩液中边搅拌边加入3倍体积无水乙醇沉淀约12h，离心(4000r/min、15min)取沉淀物，得到河蚌多糖水溶性粗提物；(9)Sevag法脱蛋白：将粗提物加适量水溶解，再加入1/5溶液体积的三氯甲烷‑正丁醇(V:V＝5:1)混合液，摇床剧烈振荡(约25min)，分液漏斗静止(约25min)使其分层，去除下层乳白色有机溶剂‑蛋白相，将上层液用相同方法反复脱蛋白若干次(约需5次以上)，直至分液漏斗内两液面间无蛋白层为止；(10)二次浓缩：将上层液置于旋转蒸发器中50℃减压浓缩至原体积的1/3～1/2；(11)二次醇沉：向浓缩液中加9倍体积无水乙醇沉淀静置12h，离心(4000r/min、15min)取沉淀物；(12)干燥：将沉淀物置于50℃烘箱中烘干，得河蚌多糖。