[发明专利]尖吻蝮蛇血凝酶‑C

摘要

本发明提供了一种尖吻蝮蛇血凝酶‑C，其是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离得到的一种血凝酶，分子量29213.4D，等电点5.7。该酶由α、β两条链构成，链间由二硫键连接，其中α链具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，β链具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明尖吻蝮蛇血凝酶为丝氨酸蛋白酶。本发明丝氨酸蛋白酶是用以下纯化方法获得，包括通过硫酸铵分级沉淀预处理去除不溶物及杂蛋白，再通过两次阴离子交换柱层析，收集活性洗脱峰，经透析、超滤浓缩及脱盐后即得高纯度蛇毒血凝酶，其比活力不低于40U/mg蛋白，HPLC分析纯度可达95%以上，以蛇毒原料重量计纯化收得率为0.4%－0.5%。

主权项

尖吻蝮蛇血凝酶‑C，该酶由α、β两个亚基构成，其中α亚基具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；β亚基具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，分离自中国尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)其分子量为29213.4D，等电点pI为5.7，其通过以下纯化方法获得：1)、将中国尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒经硫酸铵分级沉淀预处理；2)、将预处理后的蛇毒溶液上经预平衡的DEAE－Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱，用0.01M pH7.0～7.5的PBS洗柱，再用含0.02M和0.06M NaCl的0.01M pH7.0～7.5的PBS分段洗脱，收集0.06M NaCl溶液的第一个洗脱峰；3)、将上述洗脱液适当浓缩后透析或经反复稀释超滤浓缩去除NaCl；4)、将透析后的溶液再次上经预平衡的DEAE－Sepharose Fast Flow层析柱，用0.01M pH7.0～7.5的PBS洗柱，再用含0.05M NaCl的0.01M pH7.0～7.5的PBS洗脱，收集0.05M NaCl溶液的第二个洗脱峰；5)、将上述收集洗脱液适当浓缩后用无离子水透析或经Sephdex‑G25柱去除NaCl。