[发明专利]一种多细胞因子序贯缓释微球‑水凝胶复合系统及其制备方法

摘要

本发明涉及一种多细胞因子序贯缓释微球‑水凝胶复合系统及其制备方法。一种多细胞因子序贯缓释微球‑水凝胶复合系统，该复合系统包括以下的组分IGF‑1 PLGA微球、TGF‑ß3 PLGA微球、SDF‑1和PLGA‑PEG‑PLGA。本发明由于采用了上述的技术方案，将SDF‑1及分别包裹了IGF‑1和TGF‑ß3的PLGA缓释微球一起整合到PLGA‑PEG‑PLGA温敏型水凝胶中，使之能够续贯及持续缓释3种生长因子，并聚集干细胞于软骨损伤部位，以提高关节软骨损伤的修复效果。

主权项

一种多细胞因子序贯缓释微球‑水凝胶复合系统，其特征在于该复合系统按重量份计包括以下的组分：IGF‑1 PLGA微球     0.2~2份TGF‑ß3 PLGA微球    0.2~2份SDF‑1              0.001~0.01份PLGA‑PEG‑PLGA      1~10份；所述的IGF‑1 PLGA微球的制备方法如下：1）把1mg rhIGF‑1冻干粉溶于100μl去离子水中，调配为浓度为10mg/ml的水溶液，作为内层水相，即W1相；2）取500mg PLGA和140mg Span‑80溶解于10ml二氯甲烷中，作为油相，即O相；3）将W1相加入O相中，冰浴下用超声细胞粉碎机超声乳化1min后，形成初乳液W1/O；4）持续搅拌下将 W1/O初乳液缓慢匀速加入到100ml含150mg tween‑80的2% (w/v)的PVA水溶液中，PVA水溶液即外层水相W2，冰浴下3000rpm匀速磁力搅拌10min，形成 W1/O/W2双层复乳液；5）然后常温下500rpm匀速磁力搅拌6h，除去有机溶剂后固化，然后冲洗过滤，10000rpm离心10min，得到IGF‑1 PLGA微球，‑20℃保存备用；所述的TGF‑ß3 PLGA微球的制备方法如下：1）把1mg rh TGF‑ß3冻干粉溶于100μl去离子水中，调配为浓度为10mg/ml的水溶液，作为内层水相，即W1相；2）取500mg PLGA和140mg Span‑80溶解于10ml二氯甲烷中，作为油相，即O相；3）将W1相加入O相中，冰浴下用超声细胞粉碎机超声乳化1min后，形成初乳液W1/O；4）持续搅拌下将 W1/O初乳液缓慢匀速加入到100ml含150mg tween‑80的2% (w/v)的PVA水溶液中，PVA水溶液即外层水相W2，冰浴下3000rpm匀速磁力搅拌10min，形成 W1/O/W2双层复乳液；5）然后常温下500rpm匀速磁力搅拌6h，除去有机溶剂后固化；然后冲洗过滤，10000rpm离心10min，得到TGF‑ß3 PLGA微球，‑20℃保存备用；所述的PLGA‑PEG‑PLGA水凝胶的制备方法如下：1）按DLLA:GA:PEG=6:1:3的比例称取一定量的DLLA、GA和PEG1500放入烘箱中干燥2h后混匀加入到真空聚合反应瓶中，室温放置2h冷却，再加入催化剂异辛酸亚锡，异辛酸亚锡重量百分比浓度为0.02%，反复通氮、抽真空，脱除痕量水分和氧气，抽真空封管，加热到150℃反应10h，得到PLGA‑PEG共聚物；2）将聚合物溶解于二氯甲烷中，乙醇沉淀析出，得到纯化的聚合物，真空干燥至恒重得到粘稠透明产物，置于‑20℃保存备用。