[发明专利]一种构建细菌的酵母双杂交cDNA文库的方法在审
| 申请号： | 201510046952.1 | 申请日： | 2015-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN104651390A | 公开（公告）日： | 2015-05-27 |
| 发明（设计）人： | 张嘉;朱春节;许玫英;孙国萍;郭俊 | 申请（专利权）人： | 广东省微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510070 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种酵母双杂交cDNA文库的方法。它是提取细菌总RNA，再去除总RNA中的5s rRNA、tRNA及小分子RNA，再对mRNA进行富集，使用随机六聚体作为引物对富集的mRNA进行逆转录PCR合成单链的cDNA，再通过LD-PCR以单链的cDNA为模板扩增获得双链cDNA，再利用同源重组将全长双链cDNA与文库载体共同转化靶蛋白酵母菌株，获得细菌的cDNA文库。本发明提出了一种以细菌mRNA作为模板，反转录合成cDNA后构建酵母双杂交cDNA文库的方法。由于是以mRNA为模板，不仅避免了以总RNA反转录时rRNA产生干扰，也可以避免使用限制性内切酶对细菌基因组DNA的位点偏向性，文库的开放性阅读框的正确性更高，质量非常好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 构建 细菌 酵母 双杂交 cdna 文库 方法 | ||
【主权项】：
一种酵母双杂交cDNA文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取细菌总RNA，再去除总RNA中的5s rRNA、tRNA及小分子RNA，再对mRNA进行富集，使用随机六聚体作为引物对富集的mRNA进行逆转录PCR合成单链的cDNA，再通过LD‑PCR以单链的cDNA为模板扩增获得双链cDNA，再利用同源重组将全长双链cDNA与文库载体共同转化靶蛋白酵母菌株，获得细菌的cDNA文库。
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