[发明专利]一种功能化磁珠分离‑酶联适配体检测食品中土霉素的方法

摘要

本发明公开了功能化磁珠分离‑酶联适配体检测食品中土霉素的方法，其特征在于采用核酸适配体‑磁纳米粒子复合物探针，通过HRP‑OTC与样品中的OTC直接竞争结合磁珠表面的OTC适配体，底物显色检测吸光值变化来定量分析样品中土霉素含量。与传统的ELISA和酶联适配体（ELAA）相比，本发明充分结合了磁性纳米材料快速分离及富集效应、核酸适配体的高特异性和酶标板的高通量筛选特性，可大大缩短检测时间，提高检测灵敏度和特异性，降低检测成本。

主权项

一种功能化磁珠分离‑ 酶联适配体检测食品中土霉素的方法，其特征在于：采用核酸适配体‑磁纳米粒子复合物探针，通过HRP‑OTC与样品中的OTC 直接竞争结合磁珠表面的OTC 核酸适配体，底物显色检测吸光值变化来定量分析样品中土霉素含量；所述的核酸适配体‑ 磁纳米粒子复合物探针为生物素修饰的适配体连接亲和素修饰的纳米磁珠，即采用化学共沉淀法制备Fe3O4纳米颗粒，然后利用戊二醛法将氨基化的纳米磁珠与亲和素偶联；所述OTC核酸适配体的5’端修饰了生物素，通过生物素‑ 亲和素系统，同时固定于亲和素修饰的纳米磁珠表面；所述方法包括如下步骤：1）HRP‑OTC 与OTC 直接竞争结合固定于纳米磁珠表面的OTC 适配体：a. 将核酸适配体‑ 磁纳米粒子复合物探针分散于PBS 中，取100μL 添加到酶标板孔中，磁分离，去上清；b. 每孔中加入200μL 封闭液，37℃孵育40min，磁分离，PBST 洗涤多余的封闭液；c. 然后于每孔中依次加入50μL HRP‑OTC 和50μLOTC 标品溶液，37℃孵育40min，磁分离，PBST 洗涤液洗涤；d. 每孔中加入100μL TMB 底物显色液，37℃避光反应20min ；e. 最后每孔中加入100μL 终止液终止反应，酶标仪450nm 测吸光值；2）标准曲线的绘制按步骤1）的操作步骤对土霉素标准品进行检测，建立标准曲线，OTC 标准品浓度依次为0.5、1、2、5、10、25、50、100 ng/mL，以不同土霉素浓度的对数为横坐标，以抑制率B/B0为纵坐标作图，绘制标准曲线，建立回归方程，B0：OTC 标准品浓度为0ng/mL 所对应的吸光度；B ：OTC 标准品不同浓度所对应的吸光度；3）将食品样品提取液代替标准品溶液，按照步骤1）所述步骤进行检测，根据步骤2）的标准曲线计算食品样品中OTC 的含量；所述步骤1）的步骤a 中，核酸适配体‑ 磁纳米粒子复合物探针分散后的浓度为1.0mg/mL；所述封闭液为0.1% BSA；所述终止液为2.0 mol/L 的H2SO4溶液。