[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒的培养方法

摘要

本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒的培养方法，包括以下步骤(1)DMEM培养基的配制(2)在DMEM培养基中加入1‑8％的胎牛血清，进行单层细胞的培养；(3)将形成有单层细胞的培养容器内的DMEM培养基弃去，并洗液洗涤；(4)弃去洗液，向形成有单层细胞的培养容器内加入猪胰蛋白酶、细胞亲和剂和DMEM培养基；(5)将步骤(4)中的单层细胞放置细胞培养箱中静置培养1分钟‑30分钟，静置培养后取出并迅速接种猪流行性腹泻病毒，混合均匀后放置于细胞培养箱进行培养，收集猪流行性腹泻病毒液。本培养方法主要是在培养过程中通过改变病毒与细胞间的微关系，增加病毒与细胞间亲和度，使病毒更容易感染细胞。

主权项

一种猪流行性腹泻病毒的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)DMEM培养基的配制：将13.4克DMEM干粉溶于一升的去离子水中，搅拌至完全溶解后，调节pH值至6.8‑7.8，并用≤0.22μm的无菌滤膜进行除菌过滤，置于≤4℃的冰箱待用；(2)在上述配制好的DMEM培养基中加入占DMEM培养基体积1‑8％的胎牛血清，并将该DMEM培养基置于培养容器内进行单层细胞的培养；(3)将形成有单层细胞的培养容器内的DMEM培养基弃去，并用洗液洗涤2‑3次；(4)弃去洗液，向形成有单层细胞的培养容器内加入猪胰蛋白酶、细胞亲和剂和步骤(1)中的DMEM培养基，其中猪胰蛋白酶的用量为DMEM培养基体积用量的0.1‑0.5％，细胞亲和剂用量为DMEM培养基体积用量的0.01‑1％；所述的细胞亲和剂由原料混合液制成，所述原料混合液由按照质量百分数计的如下组分组成：所述无机盐由氯化钠、氯化钾和磷酸二氢钠组成，所述氯化钠占细胞亲和剂总重的0.1‑1.2％；所述氯化钾占细胞亲和剂总重的0.1‑1％；所述磷酸二氢钠占细胞亲和剂总重的0.16‑0.8％；(5)将步骤(4)中加入猪胰蛋白酶、细胞亲和剂和DMEM培养基的单层细胞放置细胞培养箱中静置培养1分钟‑30分钟，静置培养后取出并迅速接种猪流行性腹泻病毒，混合均匀后放置于细胞培养箱进行培养，收集猪流行性腹泻病毒液。