[发明专利]一种测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法

摘要

本发明公开了一种测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，属于微生物技术领域，本发明的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法应用同位素技术能够直接测定细菌生产力的被摄食率，并且具有方法简单，灵敏度高，测定准确等优点。

主权项

一种测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：(1)采集表层海水，分别通过2.0μm滤膜和20μm筛绢预过滤，分别往过滤后的海水中加入3H‑亮氨酸示踪培养，使3H‑亮氨酸在海水中的浓度为5‑40nM，培养0.5‑2h，得到两个实验样品；取同样的海水分别通过2μm滤膜和20μm筛绢预过滤，加入三氯乙酸，使三氯乙酸在海水中的体积浓度为5％，在相同条件下培养，得到两个空白对照样品；(2)培养结束后，往实验样品中加入三氯乙酸停止反应，三氯乙酸加入量使其在溶液中的体积溶度为5％，30min后，将样品分别过滤到2.0μm和0.22μm孔径的25mm直径硝酸纤维膜上，过滤结束后，先用三氯乙酸冲洗三次，然后用酒精冲洗三次，待完全干燥后再收集滤膜，用锡纸包好冷冻保存；(3)膜样加入乙酸乙酯溶解滤膜，加入闪烁液，用液体闪烁计数仪测定样品的放射性活度；细菌生产力的计算按照以下公式：BP＝U×k/S/(t·V)*3.1其中U为样品净计数，即实验样品DPM减去对照样品的DPM数；k为活度计数与居里数的转化参数；S为所加入的3H‑亮氨酸的比活度Ci/mmol，3.1为亮氨酸与细胞碳的转换系数gC/mmol，t和V分别是培养时间和过滤水样体积；通过20μm筛绢预处理培养样品的细菌生产力为0.22μm硝酸纤维滤膜测定值减去2.0μm硝酸纤维滤膜测定值，为BPG；通过2.0μm滤膜预处理培养样品的细菌生产力为0.22μm硝酸纤维滤膜测定值，为BPN；微型鞭毛虫对细菌生产力的摄食率μgC.L‑1.h‑1＝BPN‑BPG微型鞭毛虫对细菌生产力的摄食压力％＝(BPN‑BPG)/BPN)。