[发明专利]一种大肠埃希氏菌株HY‑05C高密度培养方法

摘要

本发明提供了一种大肠埃希氏菌株HY‑05C高密度培养方法，通过对菌种培养培养基和培养工艺的优化，使单位体积培养液中菌体细胞浓度提高40‑50％，天冬氨酸酶酶活提高70‑80％，从而提高单位体积细胞培养液转化富马酸生产天冬氨酸转化效率。与原工艺相比，本发明大肠埃希氏菌株HY‑05C高密度培养工艺，采用三级培养，二级种子液采用5‑10％的大接种量接入最终转化用培养液，使获得的转化用培养液菌体更加整齐，酶活持续时间延长，有利于提高后续转化效率。

主权项

一种大肠埃希氏菌株HY‑05C的高密度培养方法，其特征在于，大肠埃希氏菌株HY‑05C，保藏编号为CGMCC No.5450；将大肠埃希氏菌株HY‑05C进行液体培养，包括如下步骤：1) 菌株HY‑05C斜面菌种活化：将冷冻保存的大肠埃希氏菌株HY‑05C接种到装有活化培养基试管斜面中，35‑37℃培养24‑36小时，挑取培养好的斜面菌苔接入另一支活化用试管斜面中，35‑37℃培养24‑36小时，再转接另一活化斜面，35‑37℃培养24‑36小时即得活化斜面菌种；2) 制备菌株HY‑05C一级种子液：取步骤1）得到的大肠埃希氏菌株HY‑05C活化斜面菌种，接种到装有高密度培养培养基的三角瓶中进行培养，200rpm、35~37℃、摇床培养6‑8小时，得到一级种子液；3) 制备菌株HY‑05C二级种子液：取步骤2）得到的一级种子液以体积比1‑2‰接种量转接到装有高密度培养培养基发酵罐中进行扩大培养，控制通风比0.3‑0.6vvm，相对溶解氧浓度20‑40%，搅拌，罐压0.05‑0.07MPa，35~37℃培养7‑9小时，得到大肠埃希氏菌株HY‑05C二级种子液；4) 制备菌株HY‑05C转化用培养液：将步骤3）培养好的大肠埃希氏菌株HY‑05C二级种子液以体积比5‑10%接种量转接到高密度培养培养基中进行扩大培养，控制通风比0.15‑0.25vvm，相对溶解氧浓度20‑40%，搅拌，罐压0.05‑0.08MPa，35~37℃培养8‑10小时，制得大肠埃希氏菌株HY‑05C转化用培养液；步骤1）中，所述活化培养基所必需的营养物质包括：富马酸铵10；牛肉膏10；蛋白胨7；氯化钠5；磷酸二氢钾1；硫酸镁0.2，琼脂15~20，pH7.0~7.2，单位为g/L；步骤2）中，所述的高密度培养培养基所必需的营养物质包括：富马酸铵7~12；玉米干粉6~8；酵母粉1~4；蛋白胨6~8；氯化钠5；磷酸二氢钾1；硫酸镁0.2，单位为g/L。